生物化学第14章基因工程及其在医学中的应用
50页1、上节课的重点内容,1.掌握真核基因表达调控的特点; 2.掌握顺式作用元件、反式作用因子的概念及组成和转录因子的分类.,复习与巩固,是指利用重组DNA技术将目的基因和载体重组,再导入受体细胞内进行扩增和表达的过程。,一.基因工程(genetic engineering),第一节 基因工程,基因工程相当于目的基因的无性繁殖过程,也称其为基因克隆(gene clone)或分子克隆(molecular clone)。,第14章 基因工程及其在医学中的应用,重组DNA技术中常用的工具酶,二、 基因工程操作中常用的工具,(一)工具酶,限制性内切酶,(restriction endonuclease),定义:是一类能识别和切割双链DNA分子中 特定碱基序列的核酸水解酶,型限制酶识别序列特点回文结构,一般识别双链DNA的48个核苷酸顺序,其中以6个核苷酸顺序最为常见。,EcoR,+,Hpa,+,平端切口,粘端切口 (5和3突出端),切口:黏性切口和平端切口,(二) 载体,1.定 义:是携带目的DNA片段进入受体细胞进行扩增 和表达的工具。,2.分 类: (1)克隆载体(cloning vector):
2、使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。 (2)表达载体(expression vector):使插入的外源DNA序列转录翻译成多肽链而特意设计的载体称为表达载体。,质粒 (plasmid),特点,存在于细菌等细胞质中 双链环状DNA分子 大约 1-200 Kb 具有自主复制和转录能力 不能独立存活 在子细胞中保持恒定的 拷贝数并表达其遗传信息,常用载体:细菌质粒 噬菌体 黏粒 病毒,特点: 多克隆位点 筛选标记,三 、基因工程的操作过程,基本过程,目的基因的获取,重组DNA分子导入受体细菌,目的基因与载体的连接,克隆(或表达)载体的选择和构建,重组体的筛选与鉴定,克隆基因的表达 和表达产物纯化,以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程,目 录,(一)目的基因的获得,1. 化学合成法 要求:已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR),组织或细胞染色体DNA,基
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