核医学(八年制)第6章体外分析技术
68页1、,第6章 体外分析技术,临床医学八年制核医学教学课件,Summary,Radioimmunoassay is a highly sensitive and specific assay method (in vitro assay) that uses the competition between radiolabeled (or unradiolabeled) and unlabeled substances in an antigen-antibody reaction to determine the concentrantion of the unlabeled substances ;It can be used to determine antibody concentrantion or to determine the concentrantion.of any substance against which specific antibody can be produced.,待测物质浓度与检测手段,临床化学分析,pg/mL,ng/mL,mg/mL,mg/mL,g/
2、L,免疫分析,Therapeutic Drugs,Thyroid Hormone,Fertility Hormone,Allergy,Cancer Markers,Infectious Disease,Vitamins,Serum Proteins,常量,微量,超微量,现代医学的发展 疾病诊断的革新,可在没有任何临床症状,而病人体内发生 1. 基因表达异常; 2. 受体分布异常或受体功能改变; 3. 器官代谢异常; 4. 激素水平异常 酶、神经递质 等异常, 可早期发现。 体外分析和影像学的发展起了很大作用 例如 癌症的早期诊断,放射免疫分析法的创立 集中了放射性核素示踪技术的高灵敏度和免疫发应的高特异性,1959 美国Yalow & Berson 1960 英国 Ekims 1977 获诺贝尔医学生物学奖,开创了医学生物学超微量分析方法 使人体内微量生物活性物质的测量成为可能 对现代医学的发展起到推动作用,R:放射性核素标记抗原 高灵敏(10 -9 -15 g/ml) 探测待测物上的标记信号 (标记物的放大效应),I:免疫学反应 高特异 以抗体为结合剂 B:标记抗原与非标记抗原竞争与
3、同种抗体结合,定 义,以放射核素标记(或其他非放射性标记)的配体(Ligand)为示踪剂,以配体和结合体的结合反应为基础,在试管内进行的微量生物活性物质的检测技术。,体外分析技术是结合了放射性核素的高灵敏度和特异性结合反应的高特异性的一种超微量分析技术,具有灵敏度高、特异性强、精密度好、应用面广、方法简便等优点。,方法学基础,结合反应 遵守可逆反应的质量作用定律: k1, v1 R+L RL k2, v2,定量手段,放射性测量技术 酶定量技术 化学发光定量技术,生物学基础,特异性结合反应: 抗原-抗体的免疫结合反应; 配基-受体的结合反应; 底物-催化酶之间的酶促反应; 结合体: 抗原-抗体 激素-激素结合球蛋白 受体-配体,体外分析技术,体外放射分析,体外非放射分析,放射性竞争结合分析,放射性非竞争结合分析,放射免疫分析 (RIA),免疫放射分析,酶免疫分析,化学发光免疫分析,荧光免疫分析,(IRMA),(EIA),(CLIA),(FIA),放射免疫分析法 (radioimmunoassay),Dr. Yalow,在体外条件下, 利用Ag与定量的*Ag对限量的特异性Ab的竞争结合反应
4、,通过测定放射性复合物的量来计算出Ag 量的一种超微量分析技术。,基本原理,Ag-Ab + Ag,*Ag,Ab,Ag,+,+,*Ag-Ab + *Ag,(B),(F),*Ag与Ag 免疫活性相同 *AgAg Ab,Ag= * Ag , AgAb=*AgAb,Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag(F),Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag (F),Ag,25,50,100,200,400,800,*Ag,Ab,分离B、F,B%=B/(B+F),F%=F/(B+F),R=B/F,B1%,B2%,B3%,B4%,B5%,B6%,1,2,3,4,5,6,浓度,B%,标 准 曲 线,Ag,25,50,100,200,400,800,*Ag,Ab,分离B、F,B1%,B2%,B3%,B4%,B5%,B6%,1,2,3,4,5,6,B%,?,60,1最大结合管(Bo) 标准抗原的量为0,只有标记抗原和特异性抗体时,标记抗原与抗体充分反应后分离B和F,所测得的B的放射性为Bo。这是没有标准抗原与之竞争时,标记抗原和抗体的结合达最大值。 2非特异结合管(NSB) 标记抗原除了要和特异性抗
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