百草枯急性中毒大鼠肺组织炎症因子变化及二巯丙磺钠干预
48页1、温州医学院 硕士学位论文 百草枯急性中毒大鼠肺组织炎症因子的变化及二巯丙磺钠的干 预 姓名:贺晓艳 申请学位级别:硕士 专业:急诊医学 指导教师:卢中秋 20090501 温州医学院硕士学位论文 百草枯急性中毒大鼠肺组织炎症因子的变化 及二巯丙磺钠的干预 中文摘要 目的:探讨百草枯急性中毒大鼠肺组织T N F Q 、I L 1 0 的基因表达,肺组织H M G B 的基因及蛋白水平的表达及二巯丙磺钠的干预。 方法: 1 清洁级雄性S D 大鼠1 0 0 只,随机分成4 组:( 1 ) 正常对照组( N C 组) : 1 0 只;( 2 ) N a D M P S 对照组:1 0 只,以2 0 0 m g k gN a D M P S 腹腔注射;( 3 ) P Q 染毒组( P Q 组) :4 0 只,予1 的P Q 剂量2 0 m g k g 一次性左腹腔注射染 毒;( 4 ) 二巯丙磺钠保护组( N a D M P S 组) ,4 0 只,右腹腔注射 2 0 0 m g k g N a - D M P S 后1 5 m i n ,予1 的P Q ,2 0 m g k g 一次性左腹腔
2、注射染毒。 N C 组及N a - D M P S 对照组于染毒后l d ,P Q 组及N a - D M P S 组于染毒后6 h , 1 d ,3 d ,7 d 各取1 0 只活杀,取部分肺组织行病理观察及电镜检查,余肺组织 于液氮中保存待用。 2 观察P Q 组和N a - D M P S 组大鼠在染毒后行为学改变,肺组织病理及电镜改变。 3 R T - P C R 法检测各组大鼠肺组织T N F a 、I L 1 0 、H M G B 1 基因的相对表达量, W e s t e r nb l o t 法测定肺组织H M G B 1 蛋白的表达。 结果: 1 P Q 组大鼠于染毒后l h H P 出现少动、萎靡和厌食,症状进行性加重,5 h 后出现 呼吸急促、四肢无力等表现,1 “ 3 d 为最明显,3 d 后大鼠开始进食,精神状态、 呼吸困难及四肢无力等表现好转,7 d 时中毒症状明显减轻,进食正常,无明 显呼吸困难等。N a D M P S 组大鼠精神状态、呼吸困难等症状均明显轻于P Q 组,7 d 时大鼠基本恢复正常。 2 P Q 组大鼠6 h 、1 d 及3 d 肺泡及肺
3、血管充血水肿明显,肺泡腔见红细胞渗出,肺 间质大量炎症细胞浸润,7 d 时肺炎性细胞、充血等轻。N a - D M P S 组亦出现了 肺炎性细胞、充血等上述表现,但程度明显减轻。电镜下P Q 组大鼠肺组织上 皮细胞核固缩,板层小体空泡化,间质炎性细胞浸润,N a D M P S 组上述改变 明显减轻。 3 P Q 组及N a - D M P S 组大鼠染毒后肺组织T N F i f , m R N A 、I L 1 0m R N A 及 H M G B 1m R N A 表达量升高,T N F am R N A 以染毒后6 h 最高,I L 1 0m R N A 及H M G B 1m R N A 以染毒后1 d 最高,后逐渐降低。与同时间点P Q 组相比, N a - D M P S 组n 盯am R N A 明显下降,以染毒后6 h 及l d 明显( 氏O 0 5 ) , 2 温州医学院硕士学位论文 I L 1 0m R N A 明显升高,以染毒后6 h 、1 d 及3 d 明显( 尸 00 5 ) :( 3 ) P Q 组及N a - D M P S 组大 鼠肺组织T N F
4、nm R N A 6 h 升高最明显,l d 开始下降6 h 及l 较N C 组升高有显 著性差异( P 4 0 m g k g ( 对于成人,这个量相当于 1 5 m l2 0 百草枯浓缩液) 时,胃肠道、肺、肾、肝严重受损,很快发生多器官功能衰竭, 在1 7 d 内病死率达1 0 0 嘣化1 。 百草枯对身体各个脏器都有毒性,其中毒所致损害的机制非常复杂,至今未 能明确。既往的研究认为百草枯进入体内后经由N A D P H 辅助的单电子还原为自 由基,然后与氧反应形成超氧阴离子,后者能导致产生更多的活性氧,如:过氧 化氢、羟自由基,间接使体内巯基化合物、S O D 含量减少,影响机体的抗氧化作 用,诱导脂质过氧化反应,肺细支气管的C l a r a 细胞和肺泡上皮细胞主动转运P Q 在肺内聚集,直接损害细胞的主要成分,其氧化损伤继发信号转导通路的改变, 细胞内和线粒体钙稳态失衡,还可直接损伤D N A 并诱导细胞凋亡,异常激活肺 部免疫细胞,促使蛋白质交联、失活,因而各脏器损伤中以肺损伤最严重 1 3 , 1 4 , 1 5 , 1 6 。随着近年来对百草枯中毒分子生物学机制研究的
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