影响微生物实验室质量主要因素

1、 影响实验室质量的重要因素影响实验室质量的重要因素 杜平华杜平华 微生物实验室的质量控制微生物实验室的质量控制 实验室的规范化管理实验室的规范化管理 制定严格的管理制度制定严格的管理制度 制定规范化操作程序制定规范化操作程序 影响微生物试验结果的重要因素影响微生物试验结果的重要因素 试验菌株试验菌株 培养基培养基 微生物实验室的质量控制微生物实验室的质量控制 环境保证培养基保证 无菌性检查检查 适用性检查 有效的方法方法验证SOP操作 有效的结果 可靠的结论 结果判断 药品微生物实验室质量控制药品微生物实验室质量控制 主要内容主要内容 药品微生物实验室质量管理指导原则药品微生物实验室质量管理指导原则 WHO WHO药品微生物实验室质量管理规范药品微生物实验室质量管理规范 CNAS-CL09-2013 检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域 的应用说明的应用说明 质量可控质量可控 用药安全用药安全 2015年版年版中国中国 药典药典微生物检查微生物检查 法重大变化法重大变化 国际接轨国际接轨 CNAS 新版新版GMP WHO药品微生药品微

2、生 物实验室质量管理物实验室质量管理 规范规范; WHO质量控制质量控制 实验室良好操作规范实验室良好操作规范 标准化标准化 规范化规范化 管理科学化管理科学化 2015微生物实验室规范化管理微生物实验室规范化管理 世界卫生组织药品微生物实验室质量管理规范世界卫生组织药品微生物实验室质量管理规范 背景背景 “药品质量控制实验室质量规范的修订版药品质量控制实验室质量规范的修订版 (1)” (1)” 在在20092009年被世界卫年被世界卫 生组织（生组织（WHOWHO）药品制剂专家委员会采用）药品制剂专家委员会采用。 20112011年年6 6月月WHOWHO发布了药厂微生物实验室最佳实践的指南性文件。发布了药厂微生物实验室最佳实践的指南性文件。 以下简称微生物实验室指南以下简称微生物实验室指南 适用范围适用范围 微生物实验室微生物实验室 无菌试验无菌试验 药厂设计人员、药厂设计人员、QCQC经理、微生物实验主管、微生物检测人员、计量经理、微生物实验主管、微生物检测人员、计量 和设备确认专业人员和设备确认专业人员. . WHO微生物实验室指南微生物实验室指南内容内容 人员人员 12个要素

3、与5个参考文献构成 环境环境 检验方法的验证检验方法的验证 设备设备 试剂和培养基试剂和培养基 标准物质和标准菌株标准物质和标准菌株 抽样抽样 样品处理和鉴别样品处理和鉴别 污染废弃物的处理污染废弃物的处理 结果结果质量保证质量保证 11.11.测试程序测试程序 12.12.测试报告测试报告 WHO微生物实验室指南微生物实验室指南参考文献参考文献 附录附录1 1 操作区域的实例操作区域的实例 附录附录2 2 设备维护实例设备维护实例 附录附录3 3 不同的实验室设备的校准和校准时间间不同的实验室设备的校准和校准时间间 隔的实例隔的实例 附录附录4 4 设备资格确定与监测的实例设备资格确定与监测的实例 附录附录5 5 标准菌株通用要求标准菌株通用要求 总则总则 人员人员 设施和环境条件设施和环境条件 控制和校准方法及方法确认控制和校准方法及方法确认 设备设备 测量（计量）测量（计量） 源性源性 7. 7.抽样抽样 测试和校准物品的处理测试和校准物品的处理 检测检测和校准结果质量的保证和校准结果质量的保证 结果报告结果报告 CNAS-CL09-2013 (检测和校准实验室能力认可准则在微生

4、物检测领域的应用说明）检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明） 总则总则 人员人员 设施和环境条件设施和环境条件 控制和校准方法及方法确认控制和校准方法及方法确认 设备设备 测量（计量）测量（计量） 源性源性 7. 7.抽样抽样 测试和校准物品的处理测试和校准物品的处理 检测检测和校准结果质量的保证和校准结果质量的保证 结果报告结果报告 CNAS-CL09-2013 (检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明）检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明） WHOWHO实验室指南实验室指南 人员人员 环境 环境 检验方法的验证检验方法的验证 设备设备 试剂和培养基试剂和培养基 标准物质和标准菌株标准物质和标准菌株 7.7.抽样抽样 样品处理和鉴别样品处理和鉴别 污染废弃物的处理污染废弃物的处理 质量保证质量保证 11.11.测试程序测试程序 12.12.测试报告测试报告 微生物实验室管理规范微生物实验室管理规范 影响实验室质量的重要因素影响实验室质量的重要因素 实验菌株的质量保证实验菌株的质量保证 菌菌 种种 试验过程中，生物样本可能是最敏感的，

5、因为它们的活试验过程中，生物样本可能是最敏感的，因为它们的活 性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。 实验室菌种的处理和保藏的程序应实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，标准化，使尽可能减使尽可能减 少菌种污染和生长特性的改变。少菌种污染和生长特性的改变。 按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的按统一操作程序制备的菌株是微生物试验结果一致性的 重要保证。重要保证。 菌种保藏的重要性菌种保藏的重要性 菌种保藏是微生物检验工作中的一项菌种保藏是微生物检验工作中的一项常规技术常规技术, ,菌种菌种 的科学保藏和管理直接关系到检验结果的正确性的科学保藏和管理直接关系到检验结果的正确性. . 菌种的菌种的20152015版指导原则版指导原则 原则：原则： 药品微生物检验用试验菌应来自认可的国内或国外菌种保药品微生物检验用试验菌应来自认可的国内或国外菌种保 藏机构的藏机构的标准菌株标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效，或使用与标准菌株所有相关特性等效 的的商业派生菌株商业派生菌株。 使用时应依据使用时应依据中国药典中国药典20152015年

6、版附录年版附录 G G 药品微生药品微生 物实验规范指导原则的要求。物实验规范指导原则的要求。 菌种保藏机构菌种保藏机构 国外的菌种保藏机构国外的菌种保藏机构 使用菌种来源使用菌种来源 菌种编号菌种编号 20152015版版 CMCC CMCC 中国医学菌种保藏中心中国医学菌种保藏中心 CMCC CMCC（F F）真菌真菌 CMCCCMCC（B B）细菌细菌 协调案协调案 ATCC ATCC 美国标准菌种收藏中心美国标准菌种收藏中心 NCIMB NCIMB 英国食品工业与海洋菌种保藏中心英国食品工业与海洋菌种保藏中心 NBRC NBRC 日本技术评价研究所生物资源中心日本技术评价研究所生物资源中心 CIP CIP 法国巴斯德研究所菌种保藏中心法国巴斯德研究所菌种保藏中心 菌种保藏的中心任务菌种保藏的中心任务 常用菌种的保藏常用菌种的保藏 常用菌种的保藏常用菌种的保藏20152015指导原则指导原则 菌种的保藏菌种的保藏 菌种的保藏菌种的保藏 菌种的保藏菌种的保藏 菌种的保藏菌种的保藏 菌种的保藏菌种的保藏 工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的

7、商业衍生 物仅可用作工作菌株。物仅可用作工作菌株。 标准菌株标准菌株 实验室指南实验室指南 溯源性溯源性 实验室使用的菌株必须是国内外认可的菌种收藏中心。实验室使用的菌株必须是国内外认可的菌种收藏中心。 商业衍生菌株商业衍生菌株 通过实验室试验表明具有同等效力的也可以使用。通过实验室试验表明具有同等效力的也可以使用。 商业衍生的标准菌株只能作为工作菌株用。商业衍生的标准菌株只能作为工作菌株用。 传代一次的标准菌株可用来作标准储备菌株。传代一次的标准菌株可用来作标准储备菌株。 要进行纯度和生化检查。要进行纯度和生化检查。 标准储备菌株解冻后，则不能再重新冷冻和储存。标准储备菌株解冻后，则不能再重新冷冻和储存。 建议建议 将标准储备菌株以低温或冷冻干燥方式分装保存。将标准储备菌株以低温或冷冻干燥方式分装保存。 工作菌株工作菌株 是由标准储备菌株培养得到是由标准储备菌株培养得到。 工作菌液一般不用来进行传代培养。工作菌液一般不用来进行传代培养。 初始标准菌株只能传代培养初始标准菌株只能传代培养 5 代，而且要有标准方法或实验室文件记录证实菌株代，而且要有标准方法或实验室文件记录证实菌株 在传

8、代中未发生任何改变。在传代中未发生任何改变。 菌种的保藏菌种的保藏 不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的 保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶段：保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶段： 菌种的保藏菌种的保藏 菌种的保藏菌种的保藏 液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法 冷冻真空干燥保藏法冷冻真空干燥保藏法 干燥（沙土、牛奶）保藏法干燥（沙土、牛奶）保藏法 液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法 琼脂斜面低温保藏法琼脂斜面低温保藏法 液体冷冻保液体冷冻保 藏法藏法 液体培养基液体培养基 一定比例甘油一定比例甘油 琼脂斜面低温保藏法琼脂斜面低温保藏法 液体冷冻保藏法液体冷冻保藏法 菌种菌种保存液（保存液（2mL2mL）保存温度保存温度 保存时间保存时间 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 胰酪大豆胨肉汤胰酪大豆胨肉汤 10%10%40%40% 甘油甘油 -30-30 -80-80 半年以上半年以上 或数十年或数十年 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 大肠埃希菌大肠埃希菌 胆盐乳糖增菌液胆盐乳糖增菌液 乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌 铜绿假单孢杆菌铜绿假单孢杆菌 生

9、孢梭菌生孢梭菌 白色念珠菌白色念珠菌 黑曲霉黑曲霉 液体冷冻保藏法液体冷冻保藏法 菌种的传代和使用菌种的传代和使用 工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5 5代代( (从菌种从菌种 保藏中心获得的标准菌株为第保藏中心获得的标准菌株为第0 0代）防止过度的传代造成代）防止过度的传代造成 菌种变异。菌种变异。 1 1代代 是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培 养的形式均被认为是转种或传代一次。养的形式均被认为是转种或传代一次。 定期对工作菌株的特性和纯度进行确认。定期对工作菌株的特性和纯度进行确认。 培培 养养 嗜温性微生物：嗜温性微生物：最适生长温度最适生长温度 15154545。 嗜热嗜热性性微生物微生物：生长温度生长温度 4545以上以上的。的。 嗜冷嗜冷性微生物：性微生物：一般指生长温度为一般指生长温度为 1515以以下的。下的。 培养后微生物的生长判断培养后微生物的生长判断 固体培养基固体培养基 有菌落生长或沿穿刺线扩散生长。有菌落生长或沿穿刺线扩散生长。 液体培养基液体培养基 浑浊、菌膜、沉淀等。浑浊、菌膜、沉淀等。 菌种的传代和使用菌种的传代和使用 新鲜菌液制备新鲜菌液制备 培养基适用性检查和计数方法适用性试验用的菌液基本要求培养基适用性检查和计数方法适用性试验用的菌液基本要求 新鲜菌液：新鲜菌液： 切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。 采用适宜的保存方法采用适宜的保存方法, ,不可重复从菌种包装瓶中移取菌种或重不可重复从菌种包装瓶中移取菌种或重 新冷冻菌种。新冷冻菌种。 传代代数（每接种一次即为一代）。传代代数（每接种一次即为一代）。 培养物培养物 适宜

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