实验二血清蛋白电泳实验(范玉平)
35页1、血清蛋白电泳 (Serum Protein Electrophoresis),血清和血浆,血清:是指离体的血液经过自然凝固而析出的液体部分. 血浆:是指离体并经过抗凝的血液经过离心沉淀后的上清部分. 血清中无纤维蛋白原,简 介,人类血液中有125种以上蛋白质成分。 白蛋白、脂蛋白、抗体、补体、凝血酶原和凝血因子、抗凝血因子、1-抗胰蛋白、 1-糖蛋白、2-巨球蛋白、转铁蛋白和其他微量蛋白等成分。,历 史,1809年,Pehce(俄国物理学家)首先发现电泳现象 1937年,Tiselius(瑞典)制成界面电泳仪,应用于蛋白质研究 1948年,Wieland和Fischer建立了滤纸电泳法,奠定了区带电泳技术的基础 1959年,Raymond和Weintraub创建聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳和电泳技术,电泳是指带电粒子在电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象。 电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。,应用,电泳技术除了用于小分子物质的分离分析外,最主要用于蛋白质,核酸等生物分子的研究.由于电泳法设备简单,操作方便,具有高分辨率及选择性特点,已成为医学检验中常用的技术.,C
2、OO- COO- COOH + H+ + H+ Pr Pr Pr + OH- + OH- NH2 NH3+ NH3+ PHPI PH=PI PHPI,电泳用于分离物质的原理,电泳分类,按分离的原理不同:区带电泳、自由界面电泳、等速电泳、等电聚焦电泳 按支持介质的不同:纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 按支持介质形状不同:薄层电泳、板电泳和柱电泳 按用途不同:分析电泳、制备电泳、定量免疫电泳和连续制备电泳。,影响电泳的因素,在电泳中,电场,带电粒子和促使带电粒子移动的介质是产生电泳的三大要素.因而,影响电泳的主要因素有: 电场强度的影响 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗 温度、分子大小、吸附作用等,电 渗,液体对固体支持物的相对移动,由缓冲液的水分子和支持介质的表面之间产生的一种相关电荷所引起。如果电渗与电泳方向相同,V变大;反之变小。,血清蛋白醋酸 纤维素薄膜电泳,原 理,在 pH8.6碱性环境,血清蛋白均带负电荷,在电场中向正极移动 各种蛋白质pI不同,带电荷量有差异 蛋白质的分子大小与分子形状不相同 带电荷多、分子量小者,泳动较快;反之则较慢,电泳结果
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