ic50曲线测试实验流程
3页1、IC50 曲线的测定IC50即半抑制率, 标准曲线是一个S型曲线。IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度,半数抑制越低,说明药物对细胞的毒性越高。实验操作步骤如下:1. 细胞准备:A 细胞状态检测:从培养箱中取出细胞,显微镜下观察。状态描述:观察结果,细胞汇合度:B 细胞处理:将细胞培养基吸出后,加入2ml PBS缓冲液洗一次,加入1ml 0.25% Trypsin-EDTA,放入培养箱中静置数分钟,直至细胞完全离壁悬浮,加入5ml 含10%FBS的培养基(无抗生素)终止酶活,混匀后液体转移至15ml离心管,1000rpm 离心3min,弃去液体。C 细胞计数:于15ml离心管中加入1ml 含10%FBS的培养基 (无抗生素),充分混匀。取40ul计数,公式如下:细胞浓度(数/ml)=(4大方格细胞数之和/4)104稀释倍数最终得到的细胞密度填入下表,根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。细胞 数/孔 起始浓度(/ml)所需体积(ml)需20%FBS DMEM (ml)总体积终浓度(/ml)细胞株名D 稀释细胞2. 将稀释好的细胞用排枪加至96 / 384孔板:
2、置于培养箱37 5%CO2条件下培养24小时,待细胞贴壁后加药。3. 药物稀释:将药物进行3倍倍比稀释。4. 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上,37 5%CO2培养箱培养72h。5. 荧光素酶检测:将Celltiter-Glo与ddH20 以1:1混合,加入细胞板(96板:20ul/well; 384板:10ul/well),静置10min后,TECAN infinite F200酶标仪读值。6. 分析数据,绘制IC50曲线,寻找IC30,IC50等值。7. 验证IC50:根据IC50曲线找出IC50理论值,分别取1/2 倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证。附录:Materials for ExperimentNameCorporation96-well plateCorning384-well plateGreinerCentrifugeTube (15ml)BD FalconPipets(10ml)GreinerT-25 FlaskCorningTips,EP TubeAxygen, MatrixReagents for ExperimentNameCorporationFBSExcellDPBSHyclone0.25%Trypsin-EDTAGIBCOMediumHycloneCell-Titer GloPromegaInstruments for ExperimentNameModelCorporationInverted MicroscopeTS100NikonCO2 IncubatorBB16UVHeraeusBechtopZHJH-1109ZHCHENGCentrifuge5200KUBOTAMicroplate Readerinfinite F200TECANDispenserFillBio-Tek
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