实验一 鸡胚接种
26页1、实验一 鸡胚接种,病毒培养的宿主系统: 本动物 实验动物:家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、鸡胚 体外培养的器官、组织细胞,一、实验目的 了解鸡胚的基本结构与功能,掌握常用的鸡胚接种方法。,二、原理 鸡胚为活的动物机体,组织分化程度低,病毒易于增殖,可选择不同的日龄和接种途径,感染病毒的组织和液体中含大量病毒。,二、材料,鸡胚 10日龄 病毒 鸡新城疫病毒(NDV) 照蛋灯 打孔器 石蜡 注射器 蛋座 酒精棉球、碘酊棉球,三、鸡胚的结构与功能,卵壳 上有细孔,进行气体交换 壳膜 使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。,气室 呼吸和调节压力 绒毛尿囊膜 起胚胎呼吸器官的功能,氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。,尿囊腔 胚胎的排泄器官,内含有尿囊液,初为透明液体,是单纯生理盐溶液,以后尿囊液中尿酸盐迅速增加,胚胎发育到第12-13天后,尿囊液开始变得混浊。,6、,羊膜与羊膜腔 其中盛有羊水,胎体浸泡于其中 卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。 卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。,四、受精卵的选择,最好是来自SPF鸡群,以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的 受精卵必须新鲜,保存
2、在5-20不要超过10天,保存一个月的受精卵,孵化率将近于零。,五、孵育,孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5 相对湿度:50%-60%,必须保证具有充分的新鲜空气流通,特别是在孵化5-6天以后。 从孵育后第3天开始,每天翻卵一次。,自孵育后的第4天开始检卵,每天一次。 孵育4-5日后即可于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。,未受精卵:只见模糊的卵黄阴影,不见血管和鸡胚痕迹。 活胚:具有清晰的血管和鸡胚暗影,较大鸡胚还可见到胚动,但孵育14、15天以后胎动不明显,甚至无胎动。 死胚:血管昏暗模糊,没有胚动。,六、 检卵,七、接种前处理,用检卵灯再次检查鸡胚活力,用铅笔画出气室和胚胎的位置,并在将要接种的部位做好记号。 对鸡胚进行消毒,八、接种途径,绒毛尿囊膜接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 静脉接种 蓝舌病毒 羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒 脑内接种 狂犬病毒 眼球接种,(一)卵黄囊接种法 主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。 方法一:,取6-8日龄鸡胚,用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后,垂直放置在卵座上(大头向上) 用碘酊和酒精消毒气室端 用钢锥在气室中
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