电子文档交易市场
安卓APP | ios版本
电子文档交易市场
安卓APP | ios版本

免疫荧光实验步骤

3页
  • 卖家[上传人]:jiups****uk12
  • 文档编号:88922235
  • 上传时间:2019-05-13
  • 文档格式:DOC
  • 文档大小:30KB
  • / 3 举报 版权申诉 马上下载
  • 文本预览
  • 下载提示
  • 常见问题
    • 1、免疫荧光实验步骤 V b3 e) h: r; _* E9 M3 X r0 Z. S2 1. 直接免疫荧光法测抗原* _4 Q9 A+ c3 Q: w s: N(1)基本原理, R$ X4 ! ( 1 J将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。8 J( W# I4 O& E/ o2 P(2)试剂与仪器5 Y2 ?3 $ T( a* gl 磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4 P7 W) S7 C; Y f8 |0 ! O- W 荧光标记的抗体溶液:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释l8 R7 a; q7 p5 o1 缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2l 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制# t3 j8 g! p* W7 X) g$ F 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)l1 D) & |) 5 h0 G C 有盖搪瓷盒一只(内

      2、铺一层浸湿的纱布垫)l3 7 b% d# x6 N& A+ A7 g. o/ w: O 荧光显微镜l# l: f X; m+ x! |% Q 玻片架l G8 o2 1 W+ M3 s) _ B 滤纸l% J! b+ F1 F/ | v vl 37温箱等。* r9 U , H) b* 3 W4 q(3)实验步骤0 Y z+ ! O! R9 x2 Y2 X: D 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。6 R, B6 X/ Y5 5 e; P 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。* + R6 J g. g 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不时振荡。) s5 & L% A$ M( ) 取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。) O9 A # N. F 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度,一般可用“+”表示:

      3、 M9 d6 j- . S: 1 n(-)无荧光;()极弱的可疑荧光;(+)荧光较弱,但清楚可见;(+)荧光明亮;(+ -+)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“+”以上,而各种对照显示为()或(-),即可判定为阳性。6 q& % p/ r b* V(4)注意事项% C# U2 v$ M9 $ W& W1)对荧光标记的抗体的稀释,要保证抗体的蛋白有一定的浓度,一般稀释度不应超过1:20,抗体浓度过低,会导致产生的荧光过弱,影响结果的观察。/ 7 e% y3 M P3 n7 z; t2)染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化,染色时间可以从10 min到数小时,一般30 min已足够。染色温度多采用室温(25左右),高于37可加强染色效果,但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎病毒)可采用0-2的低温,延长染色时间。低温染色过夜较3730 min效果好的多。! e* / P; L 4 l5 U4 _3)为了保证荧光染色的正确性,首次试验时需设置下述对照,以排除某些非特异性荧光染色的干扰。0 ) D7 i: I% Y$ v% f) u5 W 标本自发荧光对照:标本加1-2滴0.

      4、01mol/L,pH7.4的PBS。6 h3 e! V& - q. Z7 K, W 特异性对照(抑制试验):标本加未标记的特异性抗体,再加荧光标记的特异性抗体。$ b4 _2 x- q5 X# L/ W6 / X. k& d 阳性对照:已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。/ |( J, g* F8 y; : W( V如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光,阳性对照和待检标本呈强荧光,则为特异性阳性染色。. Q P! U+ y s: Y4 u4)一般标本在高压汞灯下照射超过3min,就有荧光减弱现象,经荧光染色的标本最好在当天观察,随着时间的延长,荧光强度会逐渐下降。/ D, i/ x o8 Z) G0 N 5 P, : T7 m n d2.间接免疫荧光法测抗体/ 0 N _ H& H$ U( : O% D: u(1)基本原理: t1 _3 i) l5 J染色程序分为两步,第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中37保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体。第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生

      5、了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。1 C) J3 F ?4 H H; V) P(2)试剂与仪器5 ; p9 Y! S9 T/ l 磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4! i: Y: t# I+ _7 X2 B 缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制。l% A( p) : p( 1 , q/ k; T l 荧光标记的抗人球蛋白抗体:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释 。$ # m( o4 8 N) g g0 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)l B3 g8 d6 1 P) F U 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)l- F t( s1 a6 P1 t 荧光显微镜l0 F0 X; h$ k6 i$ N5 : Y8 j: S* s 玻片架l! q6 c3 e9 N4 p, j% 8 o 滤纸l- 4 u* B* v 37温箱等。l6 F( x J2 k: i, T3 C, 9 I V, 9 Z% (3)实验步骤, u2 t+ T

      6、# R a$ p# Z1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原标本片,10min后弃去,使标本片保持一定湿度。5 G9 C; # 9 k$ S) S, U* B2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本,覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内,37保温30min。2 W4 X4 J2 K8 0 |& W9 g6 L& r8 l3)取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗1-2次,然后按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸5min,不时振荡 。! O0 9 e% f3 t* O. m4)取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,滴加一滴一定稀释度的荧光标记的抗人球蛋白抗体。 W9 N. z5 E) 4 / b, b5)将玻片平放在有盖搪瓷盒内,37保温30min。 G) i% x3 * p+ . c* g* w. 4 u. 6)重复操作3。+ L; t0 A# b: b7)取出玻片,用滤纸吸去多余水分,滴加一滴缓冲甘油,再覆以盖玻片。 A/ W: V% I% W. I a7 v8)荧光显微镜高倍视野下观察,结果判定同直接法。7 , + l4 g0 H& ) _4 S U: h% L(4)注意事项* W! w0 e1 C$ m% c, r& D1)荧光染色后一般在1h内完成观察,或于4保存4h,时间过长 ,会使荧光减弱。. X& p0 p! X+ V# R0 v d7 D2)每次试验时 ,需设置以下三种对照:+ |9 L& B# U: b 阳性对照:阳性血清+荧光标记物9 g/ u. ?. H( F/ A8 J 阴性对照:阴性血清+荧光标记物; H2 Q* 3 Z: v3 S5 O: u; 荧光标记物对照:PBS+荧光标记物/ b2 o3 f K: f k8 a7 z3. 已知抗原标本片需在操作的各个步骤中,始终保持湿润,避免干燥。3 x5 k, 2 m- k- M2 C- Q G; l _4. 所滴加的待检抗体标本或荧光标记物,应始终保持在已知抗原标本片上,避免因放置不平使液体流失,从而造成非特异性荧光染色。%

      《免疫荧光实验步骤》由会员jiups****uk12分享,可在线阅读,更多相关《免疫荧光实验步骤》请在金锄头文库上搜索。

      点击阅读更多内容
    最新标签
    发车时刻表 长途客运 入党志愿书填写模板精品 庆祝建党101周年多体裁诗歌朗诵素材汇编10篇唯一微庆祝 智能家居系统本科论文 心得感悟 雁楠中学 20230513224122 2022 公安主题党日 部编版四年级第三单元综合性学习课件 机关事务中心2022年全面依法治区工作总结及来年工作安排 入党积极分子自我推荐 世界水日ppt 关于构建更高水平的全民健身公共服务体系的意见 空气单元分析 哈里德课件 2022年乡村振兴驻村工作计划 空气教材分析 五年级下册科学教材分析 退役军人事务局季度工作总结 集装箱房合同 2021年财务报表 2022年继续教育公需课 2022年公需课 2022年日历每月一张 名词性从句在写作中的应用 局域网技术与局域网组建 施工网格 薪资体系 运维实施方案 硫酸安全技术 柔韧训练 既有居住建筑节能改造技术规程 建筑工地疫情防控 大型工程技术风险 磷酸二氢钾 2022年小学三年级语文下册教学总结例文 少儿美术-小花 2022年环保倡议书模板六篇 2022年监理辞职报告精选 2022年畅想未来记叙文精品 企业信息化建设与管理课程实验指导书范本 草房子读后感-第1篇 小数乘整数教学PPT课件人教版五年级数学上册 2022年教师个人工作计划范本-工作计划 国学小名士经典诵读电视大赛观后感诵读经典传承美德 医疗质量管理制度 2 2022年小学体育教师学期工作总结 2022年家长会心得体会集合15篇
    关于金锄头网 - 版权申诉 - 免责声明 - 诚邀英才 - 联系我们
    手机版 | 川公网安备 51140202000112号 | 经营许可证(蜀ICP备13022795号)
    ©2008-2016 by Sichuan Goldhoe Inc. All Rights Reserved.