生物化学酶促反应动力学2
19页1、pH对酶活性的影响,1,温度对酶活性的影响,2,底物浓度对酶活性的影响,3,抑制剂对酶促反应速度的影响,4,Table of Contents,酶促反应的动力学实验,pH对酶活性的影响,实验原理 只有当酶蛋白处于一定的构象及电荷状态,才有利于酶和底物的结合和催化,使酶促反应最强,因此酶反应介质的pH可影响酶分子。在某一pH时,酶的催化活性达到最大值,该pH称为酶的最适pH。碱性磷酸酶的最适pH为812。 本实验采用磷酸苯二钠法,在不同的pH值的甘氨酸缓冲液条件下,测定其活性,从而确定其最适pH。 以磷酸苯二钠为底物,被碱性磷酸酶水解后则产生游离酚和磷酸盐。酚在碱性溶液中与氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化可产生红色的醌类衍生物。根据红色深浅就可测出酶的活性,从而得出酶的最适pH。,反应式如下:,实验材料 甘氨酸缓冲液、0.04mol/L底物液、酶液、0.1mol/L pH10碳酸盐缓冲液、0.5%铁氰化钾液、酚标准液、 pH8.8Tris-乙酸缓冲液、碱液、0.3% 4-氨基安替比林液、0.04mol/L Na2HPO4,实验方法,1.取试管6支 ,编号,表操作,2.加入酶液后,立即计时
2、,混匀后,在37水浴中准确保温5min。 3. 保温后,各管中立即加入碱性液1.0ml终止反应。 4.各管中分别加入0.3%4-氨基安替比林液1.0ml及0.5%铁氰化钾2.0ml充分混匀,使呈色完全。室温放置10min,以6号管为空白,不比色,用+来表示颜色的深浅.,温度对酶活性的影响,实验原理 温度对酶活性有显著的影响。温度低时,酶促反应减弱或停止,温度从较低逐渐升高时,反应速度也随之逐渐增加,当温度升高到某一定值时,酶促反应达到最高峰,此温度称为酶的最适温度。但酶是蛋白质,其本身也因温度升高而变性,超过最适温度时,其活性反而降低。一般温度升至80以上,酶活性几乎全部丧失。应指出,在进行体外实验时,酶的最适温度会随着保温时间长短而有所变化。 本实验以碱性磷酸酶为例,在一定时间,观察酶活性在不同温度下的变化。,实验步骤,1.取试管5支,编号,按表操作。,2.各管保温后,立即加入碱性试剂1.0ml以终止反应。 3.各管中分别加入0.3% 4-氨基安替比林液1.0ml及0.5%铁氰化钾2.0ml充分混匀,室温放置10min,以空白管校正零点,不比色,用+来表示颜色的深浅.,底物浓度对酶活
《生物化学酶促反应动力学2》由会员suns****4568分享,可在线阅读,更多相关《生物化学酶促反应动力学2》请在金锄头文库上搜索。
土地管理与地籍测量---第八章界址点测量
人机工程学案例分析(2)
工程安全培训_201303
第9章房地产投资决策分析
第2章房地产经纪制度
ACM程序设计-东北林业大学acm05
《亲爱的汉修先生》读书交流会
中原_深圳新世界尖岗山项目市场汇报_40P_2012年_别墅_项目分析_量价走势
五年级数学质量分析演示文稿
人工智能小镇-智慧小镇建设20180525
景观基本知识及发展历程
建设工程信息管理(2)
机电驱动技术第二章步进驱动技术
工程力学-第9章圆轴扭转时的应力变形分析与强度刚度设计
第一章第二节幼儿园文化环境建设的原则
第一章检测技术的基础知识
第一章__现代表面工程技术
第六章钢结构工程
第9节项目试运行管理
班主任工作经验交流课件(4)
2023-12-11 28页
2023-12-11 28页
2023-12-11 27页
2023-12-11 31页
2023-12-11 27页
2023-12-11 27页
2023-12-11 33页
2023-12-11 28页
2023-12-11 26页
2023-12-11 29页