HBV感染的免疫学诊断

1、HBV感染的免疫学诊断HBV表面抗原(HBsAg)及HBV表面抗体(anti-HBs)：HBsAg是病毒外膜的主要组成蛋白，一直是HBV感染最重要的血清学检测指标，也是最直接的病原学证据之一。HBsAg阳性通常意味着HBV现症感染的存在，如持续阳性时间6个月，则提示进展为慢性HBV感染。血清HBsAg 检测历经反向血凝试验（RPHA）、酶免疫法(enzymeimmuneoassay, EIA)、放射免疫法(radioimmunoassay, RIA)、荧光酶免疫法(fluorescence enzymeimmunoassay, CLIA)等方法。目前多采用ELISA法、微粒子酶免疫法(microparticle enzymeimmuneoassay, MEIA)和化学发光法等。HBsAgELISA分析灵敏度在0.20.5U/L左右，MEIA或化学发光法的分析可达0.050.10U/L。最近，推出的HBsAg定量分析技术，采用WHO的IU单位（可溯源至标准品WHO International Standard 00/588）。HBsAg定量可能对于抗病毒疗效监测有价值，但可能由于缺乏早期

2、应答变化，目前应用不多。上述HBsAg方法均属于筛查试验（screening test），还需做确认试验。但我国长期以来，因为HBsAg阳性率很高，人群多，且血清 HBsAg浓度很高，很少有实验室做确认试验。今后随着我国HBsAg阳性率的降低，逐渐成为HBV低感染区，确认试验会成为常规检测。确认试验原理是采用抗原抗体中和反应对筛查HBsAg阳性的标本采用anti-HBs中和 HBsAg，如果能中和（如出现阴性反应或吸光度值显著下降），则判断为HBsAg确认阳性。值得注意的是，HBsAg确认试验有局限性，尤其是HBsAg呈低浓度时，由于受灵敏度影响，试验可能无法得出结果。Anti-HBs是HBV感染恢复期或疫苗免疫后产生的保护性抗体。Anti-HBs的定量检测，对于评价个体对HBV的免疫应答能力，特别是评价疫苗应答效果、肝移植后使用乙型肝炎免疫球蛋白抑制HBV再感染疗效评价等有重要意义。Anti-HBs阳性（WHO推荐10IU/L）一般认为具有对HBV的保护能力。肝移植后，维持低水平的anti-HBs即具有预防HBV再感染的作用。在HBV感染自然恢复的早期，HBsAg浓度逐渐降低，ant

3、i-HBs滴度逐渐增高，可能出现抗原抗体同时存在的现象，尤其在使用较高灵敏度的试剂进行检测时，HBsAg/anti-HBs同时阳性的情况也会出现，对这种少见的血清学模式常需要随访确证。如患者在一段时间转变为HBsAg阴性/anti-HBs阳性，则可确定患者处于恢复期，如抗原抗体长期同时存在，则可能为不同型病毒或变异型病毒的再感染，进行HBVDNA检测结合基因序列分析进行确认。乙肝病毒e抗原（HBeAg）及乙肝病毒e抗体（anti-HBe）：HBV的C基因从两个不同的起始密码子起始转录，分别产生pC-mRNA(前C信使RNA)及pg-C/P mRNA(前基因组-C/P信使RNA)，前者产生pC蛋白p25，经过一系列处理最终成为HBeAg，后者合成p21的核壳蛋白HBcAg，二者又合称乙型肝炎病毒核心相关抗原（HBcrAg）。HBeAg是血清分泌性蛋白，在急性感染期，可于接触病毒后的612周检出，阳性则提示患者肝脏中病毒复制活跃并具有高度的传染性。急性HBV感染中HBeAg可在HBsAg消失之前消失，若持续阳性3个月以上常意味着病程的慢性化。HBcAg存在于Dane颗粒内和患者的肝细胞内，

4、是HBV复制的直接指标。目前多采用ELISA法、MEIA和化学发光等定性分析HBeAg，或者以信号/临界值比（S/CO）的形式半定量分析HBeAg，实质都是定性试验。血清HBeAg是临床指导抗病毒治疗以及观察闻道的常用指标，需要检测系统有很高的灵敏度和稳定性。在抗病毒治疗过程中，根据HBeAg的S/CO值或者有的系统采用的PEI单位的水平改变进行随访监测，对于抗病毒疗效判断有重要价值并以常规应用。有相当一部分经反病毒治疗后的患者血清中HBeAg的S/CO值可降至很低的水平，但未完全转阴，因此提高HBeAg检测灵敏度对于促进抗病毒疗效有重要意义。anti-HBe也是HBV感染与病毒复制的指标之一。anti-HBe检测目前主要采用两种技术：中和抑制法和竞争抑制法。中和抑制法试剂包括捕获抗体anti-HBe、酶标抗体anti-HBe及重组e抗原（rHBeAg），若标本中不含anti-HBe，则上述3种试剂会形成夹心从而给出阳性读值。竞争抑制法，即直接包被rHBeAg，使酶标anti-HBe与标本中的anti-HBe竞争性结合包被的rHBeAg。HBV核心抗原（HBcAg）及HBV核心抗体(a

5、nti-HBc)：由于血清中的HBcAg包裹在Dane颗粒内部，需裂解释放，而释放后的HBcAg又极易被血清中的anti-HBc所中和形成免疫复合体，因此一般不对HBcAg进行常规检测，也未见商品化试剂面世。2002年，Kimura等建立了一种检测变性后的HBcAg的化学发光方法，检测下限可达10g/L，其灵敏度与用PCR检测HBV DNA相当，即使是前C突变导致HBeAg不表达，仍可检出标本中的HBcAg。Suzuki等认为血清HBcAg浓度与肝内的cccDNA高度相关，检测血清HBcAg可用于监测肝内的HBV状态，与检测cccDNA及血清HBV DNA有相似作用。随着商品化试剂盒推出，HBcAg检测可能是今后一项常用指标。Anti-HBc分为IgM及IgG型，HBV急性感染早期主要产生IgM抗体。高滴度的anti-HBc IgM可作为HBV急性感染指标，常与HBsAg并存；anti-HBc IgG阳性提示既往感染，常与anti-HBe、anti-HBs并存。“anti-HBc单独阳性”（特指HBsAg、anti-HBs、HBeAg、anti-HBe均阴性而anti-HBc阳性），有少部分可能是隐匿性乙型肝炎病毒，可检出低水平的HBV DNA。长期以来anti-HBc 的检测主要基于竞争抑制法，灵敏度偏低，特异性较差，缺乏标准化，不同大家试剂间的符合率不尽如人意，尤其在临界值附近。2007年，Deng等报道了一种基于双抗体夹心法的anti-HBc ELISA试剂，在保证高特异性的前提下大大提高了灵敏度（高于对照竞争法试剂32256倍）。这些新技术的出现，也为anti-HBc 定量检测打下基础。我国今后逐渐成为乙型肝炎低发国家（目前在15岁以下人群中HBsAg阳性率已低于2%），anti-HBc 将取代HBsAg成为HBV感染的主要标志，改善anti-HBc 检测水平，无疑具有重大的现实意义。anti-HBc IgM一直都被视为乙型肝炎的特异性标志。最近报道，在慢性乙型肝炎患者体内也可检出低水平的anti-HBc IgM；同时，对HBeAg阴性的慢性乙肝患者来说，anti-HBc IgM的绝对量和滴度波动可视为病毒复制的标志，对于疗效监测可能具有一定价值。

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