酶工程 第五章 酶改性的基本理论——酶的结构及其与催化特性的关系 2013-2
119页1、1/138,酶工程 Enzyme Engineering,林范学 ,1/501,2/138,第二篇 酶的改性,酶的改性(enzyme improving) : 通过各种方法使酶的催化特性得以改进的技术过程 酶的改性的目的 提高酶的催化效率 增加酶的稳定性 降低或消除酶的抗原性 提高酶的使用效率(反复或连续使用酶) 扩大酶的使用范围(研究酶在水溶液以外的条件下进行催化反应的特性和条件) 酶的结构与功能的关系研究,3/138,常用的方法: 酶分子修饰(enzyme molecule modification) 酶分子定向进化(enzyme molecule directed evolution) 酶固定化(enzyme immobilization) 酶非水相催化(enzyme catalysis in non-aqueous phase),第五章 酶改性的基本理论 酶的结构及其与催化特性的关系,第一节 酶的化学组成 第二节 酶的化学结构 第三节 酶的空间结构 第四节 酶的活性中心 第五节 酶的结构与催化特性的关系,5/138,第一节 酶的化学组成,6/138,一、蛋白类酶的基本组成单位氨
2、基酸,氨基酸结构 肽键,7/138,8/138,9/138,二、核酸类酶的基本组成单位核苷酸,碱基+核糖+磷酸=核苷酸 3,5-磷酸二酯键,10/138,5AMP,5GMP,5UMP,5CMP,11/138,三、酶的辅因子,单成分酶:仅有蛋白质或核糖核酸组成的酶 双成分酶:除了蛋白质或核糖核酸外,还有其他非生物大分子成分的酶。,全酶 holoenzyme,无催化活性,有催化活性,决定专一性,传递电子、原子或某些化学基团,12/138,1. 无机辅因子,金属离子的作用: 参与催化反应 、稳定酶的构象。,13/138,无机辅助因子主要是指各种金属离子,尤其是各种二价金属离子。,(1)镁离子 镁离子是多种酶的辅助因子,在酶的催化中起重要作用。例如,各种激酶、柠檬酸裂合酶、异柠檬酸脱氢酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、各种自我剪接的核酸类酶等都需要镁离子作为辅助因子。,1. 无机辅因子,14/138,(2)锌离子 锌离子是各种金属蛋白酶,如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶等的辅助因子,也是铜锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)、碳酸酐酶、羧肽酶、醇脱氢酶、胶原酶等的辅助因子。,(3)铁离子 铁
3、离子与卟啉环结合成铁卟啉,是过氧化物酶、过氧化氢酶、色氨酸双加氧酶、细胞色素B等的辅助因子。铁离子也是铁-超氧化物歧化酶(Fe-SOD)、固氮酶、黄嘌呤氧化酶、琥珀酸脱氢酶、脯氨酸羧化酶的辅助因子。,15/138,(4)铜离子 铜离子是铜锌-超氧化物歧化酶、抗坏血酸氧化酶、细胞色素氧化酶、赖氨酸氧化酶、酪氨酸酶等的辅助因子。,(5)锰离子 锰离子是锰-超氧化物歧化酶(MnSOD)、丙酮酸羧化酶、精氨酸酶等的辅助因子。,(6) 钙离子 钙离子是-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等的辅助因子。,16/138,2. 有机辅因子,是指双成分酶中相对分子量较小的有机化合物。它们在酶催化过程中起着传递电子、原子或基团的作用。 (1)传递电子体:如 卟啉铁、铁硫簇; (2)传递氢(递氢体):如FMN/FAD、NAD+/NADP+、CoQ、硫辛酸; (3)传递酰基体:如 CoA、TPP、硫辛酸; (4)传递一碳基团:如 四氢叶酸; (5)传递磷酸基:如 ATP,GTP; (6)其它作用: 转氨基,如 磷酸吡哆醛(VB6) ;传递CO2,如 生物素。,17/138,(1) 烟酰胺核苷酸(NAD+,
4、 NADP+) B族维生素 许多脱氢酶的辅因子:乳酸脱氢酶、醇脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶 NAD+:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,辅酶I 一般与呼吸链相连,与分解反应偶联:(醇脱氢酶催化伯醇脱氢生成醛) RCH2CH2OH+NAD+=RCH2CHO+NADH+H+ NADP+:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸,辅酶 。 一般与合成反应相偶联。,18/138,(2) 黄素核苷酸(FMN和FAD) 维生素B2(核黄素)的衍生物 各种黄素酶(氨基酸氧化酶、琥珀酸脱氢酶等)的辅助因子 FMN:黄素单核苷酸 FAD:黄素腺嘌呤二核苷酸 FMN和FAD的主要作用是传递氢。,19/138,(3)铁卟啉 铁卟啉是一些氧化酶(如过氧化氢酶、过氧化物酶等)的辅助因子。 它通过共价键与酶蛋白牢固结合 。 (4)硫辛酸 硫辛酸全称为6,8-二硫辛酸。它在氧化还原酶的催化作用中,通过氧化型和还原型的互相转变而起传递氢的作用 。 (5)核苷三磷酸(NTP) 腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、鸟苷三磷酸(CTP)、胞苷三磷酸(CTP)、尿苷三磷酸(UTP)等。它们是磷酸转移酶的辅助因子。,20/138,(6)鸟苷 鸟苷是含型I
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