间接免疫荧光法实验操作常见问题(20110524)
49页1、,间接免疫荧光法实验操作常见问题 及解决方法,间接免疫荧光法所遇问题的解决方法,实验操作 避免错误 识别错误的来源,准备 稀释 加样 血清温育 清洗,间接免疫荧光法操作流程(1),1 sec flush 1 min cuvette,间接免疫荧光法操作流程(2),加荧光标记抗体 温育 清洗 封片 结果判断,1 sec flush 1 min cuvette,间接免疫荧光法问题的解决方法错误的避免 (1),清洁工作台 用通常的家用洗涤剂和蒸馏水清洗加样板的反应区,用纸巾吸干。 在作某些特殊检测时需要使用消毒液清洗加样板。 只有当生物薄片载片平衡到室温后方可打开包装。 可用防水的黑色标记笔在生物薄片载片的正面作标记。 只能在手可触摸的区域作标记。 不要触摸生物薄片。,实验准备阶段:,间接免疫荧光法工作台的布置,间接免疫荧光法问题的解决方法错误的避免 (2),样本稀释阶段:,在稀释前用旋涡混匀器混匀标本。 用可靠的去离子水配置PBS-吐温缓冲液。 确保已稀释标本的量足够用于所计划的所有实验。 用PBS-吐温缓冲液稀释病人标本。,间接免疫荧光法问题的解决方法错误的避免 (3),应把窗户关上,以避
2、免已稀释样本的蒸发。 因塑料制品会吸附抗体,造成抗体浓度的下降,所以最好用玻璃管稀释样本。 将样本滴加在加样板的反应区。 加样量要准确。 避免产生气泡。 加完所有样本后方可开始温育。,滴加样本至加样板的反应区:,间接免疫荧光法问题的解决方法错误的避免 (4),确保液滴与生物薄片接触良好。 避免样本之间相互接触。 避免快速移动加样板。 确保生物薄片与加样板的反应区吻合良好。 避免缩短或延长温育时间。,血清温育阶段:,间接免疫荧光法问题的解决方法(5),用PBS-吐温缓冲液流水迅速冲洗载片 (用大口杯,不要用细颈瓶)。 流水冲洗载片后立即放进盛有PBS-吐温缓冲液的小杯中浸洗。,清洗:,清洗,间接免疫荧光法问题的解决方法(6),荧光二抗直接使用 不要将结合物放在阳光直射处。,荧光素标记的二抗(结合物)的使用:,间接免疫荧光法问题的解决方法错误的避免 (7),从小杯中垂直取出载片。 用事先叠好的纸巾从背面擦拭载片。 不要擦拭反应区之间的间隙。 5秒钟内进行第二次温育。 从现在开始,避免阳光直射载片,直至实验结束。,载片在第一次清洗后的处理:,载片的擦拭,间接免疫荧光法问题的解决方法错误的避免
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