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pcr技术及肿瘤三项介绍课件

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1、PCR技术及肿瘤三项应用,主讲人：赵晶晶 2015.7.31,PCR,PCR的基本原理变性,复性,半保留复制 PCR三步曲变性 9097 退火 4555 延伸 72左右,聚合酶链式反应：是一种放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。,循环次数 DNA的链数 1 21 2 2 22 4 3 23 8 10 210 1024 20 220 1,048,576 30 230 1,073,741,824 10亿,PCR循环次数与DNA产量关系,PCR特点：高效扩增、忠实复制,实时荧光定量PCR,是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应循环后产物总量的方法。实现了对DNA模板的定量而且具有灵敏度高、特异性和可靠性更强，能实现多重反应、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。,荧光定量PCR的临床应用,感染性疾病的诊断母婴传播的控制与观察遗传疾病的诊断肿瘤的诊断法医学鉴定个体化用药指导,7,预警,遗传相关疾病,疾病相关遗传缺损,药物基因组学,关联分析,药物相关遗传缺损,预防,个体化治疗,HGP启动了个体化医学/基因组医学,治疗方法开发基因治疗药

2、物治疗,人基因数：22,000 潜在药靶：22,000 现有药靶：500,8,个体化药物治疗的目的,避免药物不良反应,最大化药物效应,选择有效个体,EGFR基因突变检测 KRAS基因突变检测 BRAF基因突变检测二氢嘧啶脱氧酶（DPD）基因突变检测 UGT1A1基因多态性检测,PCR技术在肿瘤个性化治疗中的应用,肺癌居于我国恶性肿瘤死亡率之首，每年新增60万患者，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占85%。,EGFR 表皮生长因子受体; 是上皮生长因子细胞增值和信号传导的受体；与肿瘤细胞的增殖，血管生成，肿瘤侵袭，转移及细胞凋亡抑制有关。 KRAS 鼠类肉瘤病毒癌基因；是细胞信号内传导途径中的一种信号传导蛋白；像是体内的一个开关，正常时可以抑制肿瘤细胞生长，一旦突变，就会刺激细胞生长，打乱规律，从而导致肿瘤的发生。 BRAF 是一种癌基因，是EGFR通路中的重要转导因子，参与调控细胞生长，分化和凋亡等多种生理过程。,肿瘤三项,12,TK,TK,细胞存活 (抗细胞凋亡),PI3-K,STAT3,AKT,MEK,基因转录,MAPK,细胞增殖 /分化,化疗/放疗抵抗,血管增生,肿瘤细胞迁移扩散

3、,pY,pY,RAS,RAF,SOS,GRB2,pY,G1,S,M,G2,非小细胞肺癌(NSCLC) 组织中EGFR高表达； EGFR对肿瘤的增殖、分化、迁移等起重要作用抑制EGFR活性可阻断下游的信号传导，抑制肿瘤细胞生长、转移和血管增生，促进肿瘤细胞凋亡,表皮生长因子受体（EGFR）,用于检测肺癌、结直肠癌等恶性肿瘤患者肿瘤组织EGFR（表皮生长因子受体）基因的突变情况。 EGFR突变检测可协助医生选择易瑞沙（Iressa，Gefitinib，吉非替尼)、特罗凯（Tarceva，它赛瓦；Erlotinib，厄洛替尼）等靶向药物的有效人群。EGFR突变的患者建议使用该类药物治疗，无突变者不建议使用该类靶向药物。,EGFR基因突变检测是NSCLC靶向用药的必检项目,K-ras基因是编码一个GTP结合蛋白的癌基因，其表达产物是EGFR信号传导通路上的重要蛋白。 K-ras基因突变一般会使结直肠癌和肺癌患者络氨酸激酶抑制剂产生耐药。,判断肿瘤的发生发展、预后以及了解肿瘤的治疗效果：正常人血中检出Kras基因异常，提示存在肿瘤易感性；良性肿瘤患者检出Kras基因突变,提示有恶变的可能；

4、 Kras基因突变阳性，即使病理组织学诊断淋巴结转移阴性，癌症复发的可能性也很高；美国国立癌症综合网络(NCCN)肿瘤临床指南及其中译版均明确指出：只有K-ras野生型患者才建议接受靶向药物的治疗，突变型患者不建议进行分子靶向治疗。检测Kras基因突变可筛选用药人群，实现肿瘤患者的个体化治疗，延长患者生存期。,17,增殖,野生KRAS,EGFR,西妥昔单抗,细胞内,细胞外,细胞膜,野生型,K-ras野生型的EGFR通路,K-ras突变型的EGFR通路,CTGGTGCCG,Kras基因是RAS超家族中的原癌基因，其编码蛋白的激活/失活受控于上游EGFR信号。单克隆抗体阻断EGFR和Kras蛋白等下游信号传导通路，抑制和逆转肿瘤的发生和发展。,突变型Kras蛋白功能异常，无需EGFR活化信号刺激仍处于激活状态，且不可控而始终处于激活状态，导致肿瘤的持续增殖。对抗EGFR药物治疗无效。,BRAF介绍及应用领域,黑色素瘤概况,恶性黑色素瘤(黑色素瘤)是临床上较为常见的皮肤粘膜和色素膜恶性肿瘤，也是发病率增长最快的恶性肿瘤之一，年增长率为35。2010年全球黑色素瘤新发病例199 627

5、例，死亡例数为46372例1。虽然黑色素瘤在我国发病率较低，但近年来成倍增长，每年新发病例约2万例1。,1CSCO黑色素瘤专家委员会，中国黑色素瘤诊治指南(201 1版)，临床肿瘤杂志2012年2月第17卷第2期,BRAF基因与黑色素瘤,检测我国468例原发黑色素瘤标本，BRAF突变率为25,9其中BRAFV600E是最常见的突变位点(87)，这为中国患者使用BRAFV600E抑制剂(Vemurafenib)提供了理论基础1。 B-raf基因V600E突变导致抗EGFR抗体或EGFR酪氨酸激酶抑制剂类肿瘤靶向药物的耐药。部分没有 K-ras 基因突变的患者也会对 EGFR靶向药物产生耐药性，研究证明这主要是由于K-ras 下游的 B-raf 基因 V600E 突变造成的,1CSCO黑色素瘤专家委员会，中国黑色素瘤诊治指南(201 1版) 临床肿瘤杂志2012年2月第17卷第2期,B-raf 基因突变在多种恶性肿瘤细胞中都有报道，除了结直肠癌外，B-raf 在恶性黑色素瘤、肺癌、甲状腺癌、卵巢癌等均存在不同比例的突变。检测 B-raf 基因突变可用于指导EGFR-TKI 的靶向用药,谢谢,

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