现场调查中的实验室支持-2012

1、现场调查中的 实验室支持,海南省疾病预防控制中心 微生物检验科 0898-65378235 13337610017,实验室诊断的目的意义, 识别暴发、确定病因 确定传染来源 确定流行范围 确定传播链 发现特殊的菌株和/或毒株 判断院内交叉感染 仲裁依据,临床,实验室,流调,围绕病因假设进行 进一步证实共同的危险因素,专业知识、经验 充分物质准备 高度的责任心,围绕病因假设,采集检测样品、确定检验项目,采样,采什么样 什么时间采 怎么采 采多少 样品的保存运送,现场流调人员应充分了解各种标本的采集、保存和运送方法，了解实验室常见的诊断方法和检测结果的意义，懂得如何将现场调查结果和实验室结果密切结合，有利于更加科学合理地分析突发事件或疾病暴发流行的原因。,采 样,标本的采集,标本是进行一切实验室检测的基础。 标本的质量直接关系到实验室检测的准确性与效率。 影响到处置事件的评估与策略制定,采什么样,不同的检验目的 病原分离、抗原-抗体检测、分子生物学检测、理化项目检测等 不同的疾病 细菌性、病毒性、毒素、化学物质等,采什么样,人体 粪便、呕吐物、尿液、痰液、咽拭子、洗漱液、脑脊液、化脓灶、血

2、液、头发、指甲、牙齿、尸检材料、胃内容物等 环境 水、土壤、餐具、厨具、食品包装、奶瓶等 食品 成品、半成品、调料、生鲜原料、蘑菇等 媒介 苍蝇、臭虫、蜱、螨、老鼠、蟑螂、果子狸、跳蚤等 其他 注射器、可疑药物、动植物等,采什么样 例如：1、鼠疫： 血液、腺肿抽取物、痰液、咽拭子 咽部冲洗物、皮肤拭子或刮取物以及患有脑膜炎病人的脑脊液。,采什么样 2、季节性流感、人禽流感、甲型H1N1流感、麻疹等呼吸道病毒引起的疾病的病原分离： 采集鼻咽拭子、含漱液，气管抽取物，最好在发病后3天内采集。 尸检材料:肺、气管、肾、脾、肝、心脏、脑、血凝块等组织和淋巴结等重要器官。,采什么样 3、怀疑细菌性食物中毒的，应采集病例呕吐物、排泄物、残留食物、炊具涂抹物、食物加工的原材料、食品加工人员的相关检材等。,采什么样 4、 SARS、人禽流感、不明原因肺炎患者： 疑似病例、临床诊断病例等，至少应采集鼻咽拭子和血清样本。 标本采集的同时要注意对同一病例采集不同病程的标本，如发病初期、发病第2或第3天再次采集及恢复期（发病3-4周以后）等标本。 对死亡病例，要做好尸体解剖和标本保藏。,采什么样,对 照： 食

3、物中毒：出现症状的人未食用过的食物 未出现症状的人食用过的食物 传染病：未出现症状的人的样本,什么时间采 病毒分离标本最好在发病初期（1-3天）采集 或在初次就诊时采集 细菌性感染、食物中毒的样本要尽早采集 ，在使用抗生素前采集 恢复期血清：通常为发病后4周左右，但副溶血性弧菌感染后的恢复期血清应在发病后1周采集（发病2-3天内为急性期）,什么时间采 氟乙酰胺（一些杀虫剂的主要成分）在体内数小时后就开始转化为氟乙酸，血中在十余小时或数天后就检不出氟乙酰胺，这个阶段体内氟乙酸浓度仍较高，所以应该采集患者的血样或尿样来检测氟乙酸； 毒鼠强在体内代谢缓慢，中毒后数月后采集的血样对病因确定仍有重要价值。,怎么采,不同检验目的的样品 细菌分离 病毒分离 抗原-抗体检测 化学毒物检测 基因检测,怎么采,样品采集程序 采样用物品准备 采样程序方法 采样记录 样品编号 样品保存,采样用物品准备 细菌性疾病标本采集的准备： 1、无菌棉签、灭菌肉汤管（通用）、CB保存液管（沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、空肠弯曲菌等）、碱性蛋白胨水（霍乱弧菌）、灭菌吸管、灭菌盐水瓶或三角烧瓶等 2、防护服、口罩、帽子、乳胶

4、手套等。 3、废弃物回收袋,采样用物品准备 病毒性疾病标本采集的准备： 1、装有3ml病毒保存液的15ml塑料螺口试管、无菌棉签（鼻咽拭子）、无菌采血管（血）、5ml一次性注射器、50ml塑料螺口试管（粪便或尿液）、 2、记号笔、冷藏背包（内放冰排1块或2块）、干净的塑料袋或大孔试管架、酒精棉球等。 3、防护服、口罩、帽子、乳胶手套等。 4、废弃物回收袋、（针头专用回收盒）,样本标签内容,样本编号唯一性 病例姓名 检材名称：咽拭子、肛拭子、脑脊液、疱疹液、粪便 样本数量包装中样本的数量，若同时采集了2支咽拭子， 就要标注为2 支 采样时间,样本标签必须标注的部位,最小包装（每个标本） 每个包装箱 每批样本后要附上一个样本清单，详细列出此批样本的名称、状态和注意事项。如病人的信息,样本送检单,样本编号唯一性 姓名、性别、年龄 、家庭住址 检材名称 样本数量如：咽拭子8支、肛拭子5支、疱疹液2份等 采样地点、采样人 检测目的 样本处理情况：抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品） 采样时间、送样时间、送样人,病毒性疾病标本采集,血标本-血清 需采集多份血清标本 至少 急性期（发病7d内或

5、发现时） 恢复期（与急性期间隔2-3周） 分别采集外周静脉血各5ml6ml，分离后的血清分装于3个塑料螺口血清管中 一份0.5ml左右，用于即将开始的检测 一份检测备份 一份留存,媒介和动物标本 疑似虫媒传染病或动物源性传染病,病毒性疾病标本采集,病毒性疾病标本采集,呼吸道标本 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、痰液 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、胸水、肺组织活检标本 消化道标本 患者的粪便和肛拭子 要求：发病早期即开始采集，根据病程决定采集的频次，采好的标本分装于3个螺口塑料试管中,病毒性疾病标本采集,尸体解剖: 不明原因疾病的死亡病例 尽可能采集死亡病例的所有组织器官 应根据疾病的临床表现，采集与疾病有关的重点组织器官标本（如肺、肝穿刺） 做病原学研究的组织标本采集得越早越好，疑似病毒性疾病的标本采集时间最好不超过死后6h 病理检查的标本不超过24h 同种组织每一部位至少采集3份标本，1份用于病原学研究（无菌采集），1份用于病理学研究（固定于福尔马林中），1份用于电镜检查（固定于电镜标本保存液中） 重要的组织器官应多部位同时采集标本,病毒性疾病标

6、本采集,其它人体标本 包括脑脊液、疱疹液、淋巴结穿刺液等 采集好的标本分装于3个螺口塑料试管中,病毒性疾病标本怎么采 鼻拭子标本：将棉签轻轻插入鼻道内鼻鄂处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子拭两侧鼻孔，将棉签浸入采样液中，尾部弃去。 咽拭子标本：用棉签适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签浸入采样液中，尾部弃去。 可将鼻咽拭子收集于同一采样管中。,病毒性疾病标本怎么采 血清标本：无菌采集病例血标本3-6ml，待血清自然析出后再放入冷藏包中，尽快送达检测实验室。血清未单独分装前不能冷冻，否则会溶血。 粪便标本(AFP、麻疹风疹）无菌采集粪便5-8克，装入50ml塑料螺口试管中，立即放入冷藏包中或冷冻保藏，尽快送达检测实验室。,细菌性疾病标本怎么采,病原分离培养及分子生物学检测： 采集血液（加抗凝剂）、咽拭子（如对流脑病人密切接触者和健康人群进行带菌检验时采集，即无菌棉拭子探入口腔内悬雍垂后面的鼻咽部位涂抹该部位粘膜分泌物，直接接种双抗血平板或双抗巧克力平板。接种时应三区划线，不可密涂。）、肛拭子(插入肛门内3-5cm处采集，转动取出插入适宜的增菌液或CB保存液)、粪便（采集有性状改变

7、的位置如脓、粘液、血等，量足够：成形粪便 3-5g以上，液态便：3-5ml以上）、脑脊液、皮肤破损处涂抹物等。,细菌性疾病标本怎么采,咽拭子,采集鼻咽分泌物,接种选择培养基,三区划线,流脑咽拭子标本的采集,细菌性疾病标本怎么采 细菌性疾病标本一般无需冷藏，但腹泻粪便标本4保存，并尽快送到实验室，疑似弧菌感染室温运送。流脑标本也需保温运送，最好现场接种培养基，以提高病原菌检出率并尽快送检，接种过的培养基可在室温（2025）放置46小时，运送温度不低于18不高于37。 抗体测定：血液（不加抗凝剂），急性期（发病7d内或发现时）恢复期（与急性期间隔2-3周）分离血清，分装于3个塑料螺口血清管中 一份0.5ml左右，用于即将开始的检测 一份检测备份 一份留存,怀疑化学物质中毒的样本怎么采,疑为百草枯中毒患者的血液不能用玻璃试管，因为玻璃可以使百草枯钝化，钝化后实验室是不能检出的。 疑为一氧化碳中毒者应尽早抽血5-15毫升注入玻璃试管内，量要直装至瓶口，必须用密封玻璃塞塞紧，避免瓶中残留空气，血液是分析一氧化碳中毒的唯一检体。其他易挥发毒物样本也要尽量密封保存，尽快检测。如氰化物。 对死亡患者一

8、般从心腔内采集血液，也可采集腋下静脉、颈静脉、股静脉血液，心腔内血液和周围血中毒物浓度不同。,样本采集的一般需要量 样品种类 检验目的 样品量 饮用水 全分析及致病菌 5 L 液体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200 ml 固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200 g 呕吐物 致病菌或毒物分析 50 g (ml) 洗胃液 致病菌或毒物分析 200 ml 腹泻物 致病菌或毒物分析 50 g (ml) 血液 病原分离、抗体分析 5 ml 脑脊液 病原分离 2 ml 皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取,采多少,采多少,所有标本在采集时立即分装，一式 N 份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样),做好样品标记,样品标记非常关键，是所有标本辨识的唯一标志，绝对不能出现任何错误 标本采集过程中，应保证采样记录表登记、采样日志记录与样品标记同时进行，并确保编号一一对应 样品编号需要在标本容器表面与容器盖顶上同时进行标记，避免容器与盖子错配，造成标本的交叉污染,病毒标本保存,血清可在4存放3d、-20以下长期保存。用于病毒等病原分离和核酸检测的标本应尽快进行检测 24h内能检

9、测的标本可置于4保存，24h内无法检测的标本则应置于-70或以下保存，但应避免反复冻融。,样品的包装,感染性样本：确保人员的安全和标本的完整 用三层包装层进行三层包装 放射性样本 易腐蚀性样本 挥发性样本,样品的运送,标本应由专业人员专人运送，使用专车。 传染性疾病的样本不能通过邮寄方式运送，必须按照UN3373、UN2814 的要求进行包装和运输。 在运送过程中，要保证条件能够持续保障。,样品的保存容器、介质、温度,检测目的 细菌 病毒 寄生虫 抗原抗体 核酸 化学毒物 预期保存时间,样品的保存运送,安全性 样品的安全 环境的安全（不泄漏、不污染） 交接手续,检 验,检什么,病原分离 细菌需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、L型菌 病毒 细胞系 寄生虫,检什么 血清学检查： 抗原 抗体 急性期IgM抗体 急性期和恢复期双份血测定特异性IgG抗体。 核酸检测 特征基因、毒力基因、溯源比较 定性/定量,怎么检,灵敏度、准确度、重现性、不同方法结果的可比较性 用什么标本 用什么方法 用什么试剂,结果的报告、解释、分析,结果的报告、解释、分析,实验室检测结果是确定病因的重要依据，但实验室结果要和现场调查情况、患者的临床表现一起分析，才能确定病因。,细菌性食物中毒的实验室诊断,致病菌的定量检验 对细菌性食物中毒的调查 需要做定量检验的细菌（食物中毒与摄入量有关） 产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌、变形杆菌 样品：中毒相关食品、粪便、呕吐物,结果的报告、解释、分析,检验结果的正确性不仅取决于实验室的条件和技术水平，同时还与检验样品的采集、保存、送样方法等方面有关。因此在分析检验结果时，除了应考虑结果是否符合有关实验室判定标准外，还应综合考虑各种影响检验结果的因素。,结果的报告、解释、分析,阳性结果不一定能说明病原因子在暴发事件中的致病作用；反之阴性结果也不一定能完全否定某种病原因

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