实验一-培养基的制备、消毒灭菌及油镜的使用-
33页1、微生物学实验,课堂纪律,严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退(1次) 迟到(3次) 不能做与实验无关的事,实验室安全和卫生,安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器,卫生 每次实验需留下6位同学值日,协助保持实验室清洁,1、了解培养基的概念、种类和用途,明确培养基的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法步骤。,实验目的,一 培养基的配制,培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多,营养类型多样,加之实验和研究目的不同,所以培养基的种类很多,不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素,且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求,还必须控制培养基合适的pH。,实验原理,常用凝固剂是琼脂,固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%;半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。,实验原理 (continued),常用培养基: 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于
2、细菌的培养;高氏一号培养基用于培养放线菌;麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养;马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。,牛肉膏蛋白胨培养基配方:,牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6,5-6人一组,每组 500ml 斜面2支(每人),余装三角瓶,1、称量及溶化,2、调pH,3、加琼脂、溶化、定容、(过滤),4、分装(每人2只试管)、加塞、包扎,5、灭菌,6、摆斜面,操作步骤,称量与溶化:,注意: 1)牛肉膏的称取:用玻璃棒蘸取适量牛肉膏,抹于称量纸上,勿取过量,不足时,再蘸取少量,逐步添加;然后将牛肉膏连同称量纸放入水中,稍等片刻牛肉膏即从称量纸上脱落,用玻璃棒将纸捞出即可。,操作步骤 (continued),加琼脂、溶化、定容、(过滤), 琼脂一般应在调好了pH后加入,琼脂的加入不会影响培养基的pH。 琼脂加入后应煮沸数分钟,以使其完全溶化,否则易出现分布不均,导致部分斜面不凝固或过软,另外部分则琼脂过多。 加热过程中因水分蒸发而可能使培养基体积减小,应补充水分至所需量。,操作步骤 (continued),
3、分装:,1)装量: 液体试管高度的1/4左右 固体试管高度的1/5 ,灭菌后摆斜面 半固体一般为试管高度的1/3,灭菌后垂直放置,操作步骤 (continued),分装:,2)分装装置:,操作步骤 (continued),3)注意: 分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染;若不慎沾在了管口,可用湿纱布揩净。,棉塞制作方法:,加塞: 棉塞 或 硅胶塞 作用:防止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。,包扎:,加塞后,试管通常每7支一起,包上一层牛皮纸或两层报纸,用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。 以活结形式扎紧,以便使用时容易解开。 用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。,操作步骤 (continued),灭菌时包牛皮纸,灭菌:, 培养基灭菌一般采用压力蒸汽灭菌 通常灭菌条件为1.05kg/cm2, 121.3灭菌20分钟;含糖量高的培养基,如马丁氏培养基则为0.56kg/cm2,112.6灭菌30分钟。 操作步骤详见下一课件,操作步骤 (continued),摆斜面:, 成扎摆放,不需将每支试管单独摆放 最好待培养基冷至6
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