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    • 1、June, 2014,维生素D通过NF-B通路对小鼠溃疡性结肠炎的保护作用,答辩人:安琦 导师:邱服斌,Agenda,目的方法,2,研究背景,1,结果与讨论,3,4,结论,3,Underground of Ulcerative Colitis,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是一种病因尚不十分清楚的直肠和结肠慢性非特异性炎症性疾病,病变主要限于大肠粘膜和粘膜下层。主要症状有便血、腹痛、腹泻等,病因尚不明确。,3,UC流行趋势与危害,该病发病率和患病率在我国有明显增加趋势。现阶段,UC 的内科治疗仅能缓解病情,尚不能根治,存在疗程长、停药后易复发的缺点,同时 UC 的发生及进展又存在癌变威胁。,UC定义,4,Underground of Ulcerative Colitis,UC病因,关于UC的发病机制已形成共识,即遗传易感性为基础、环境因素参与,黏膜免疫系统对肠腔内抗原物质的异常免疫应答造成肠道损伤。简而言之就是由细菌成分引发机体自身免疫,感染和免疫是UC发病的关键。 目前促炎性细胞因子与抑炎性细胞因子之间的平衡失调所致免疫异常被视为UC的重要发病机制。,遗

      2、传因素,感染,免疫异常,环境因素,目前研究,确立了NF-B在炎症反应中的中心地位。研究仅限于炎症与肿瘤关系的相关研究,而在溃疡性结肠炎方向国内研究尚无。 治疗UC的新思路:阻断NF-B信号通路,减少细胞因子、炎症介质的产生,减轻炎症反应。,5,Underground of NF-B,炎症因子与NF-B,3,炎症因子,NF-B,炎症因子,6,Underground of NF-B,3,核转录因子B(Nuclear factor-kappa B,NF-B)是一类关键性的核转录因子,作为信号转导途径中的枢纽,具有广泛的生物学活性。参与炎症、肿瘤、免疫、细胞增殖和细胞凋亡等多种生理、病理过程的基因调控。 IB 是一种能特异性结合并抑制NF-B 的蛋白,与p50 /p65 异源二聚体结合形成三聚体,掩盖其核定位信号NLS,从而使NF-B 以失活状态存在于细胞浆中。 IB 激酶(IKK)是一种蛋白激酶复合体 。 IKK 磷酸化IB 并诱导其降解,使NF-B 从复合体中解离后转运至细胞核启动下游基因的转录。因此,IKK 是激活NF-B 经典途径的关键亚基。,NF-B定义,TNF- IL-6,TNF-

      3、,LPS, mitogens,virus,7,Underground of NF-B,TNF- IL-6,TNF-,LPS, mitogens,virus,通过抑制以 IKK为核心的NF-B信号转导途径,可能为防治溃疡性结肠炎开辟新途径。,Underground of Vitamin D, 维生素D功能 调节体内钙磷代谢 牙齿及骨骼正常生长发育 体内大多数组织及细胞都存在维生素D受体 维生素D及其受体在抗细菌感染及免疫调节方面发挥重要作用, 维生素D缺乏与UC 国内外多项研究表明,UC患者普遍存在VitD缺乏。,维生素D通过NF-B通路对溃疡 性结肠炎是否有保护作用,维生素D的补充是否一定程度减少溃疡性结肠炎的发生? 维生素D是抑制NF-B? 维生素D是否通过IKK抑制NF-B通路?,,维生素D的补充是否一定程度减少溃疡性结肠炎的发生? 维生素D是抑制NF-B? 维生素D是否通过IKK抑制NF-B通路?,,研究目的,2019/4/21,研究方法,表-1 实验分组、造模及干预情况,雌性C57BL/6小 鼠龄6w,36只 随机分为4组,研究方法,表-2 实验分组及实验分期,2019/4/2

      4、1,2. 分子生物化学检测,疾病活动指数,测定指标,一般情况、体重变 化、粪便性状、血便等,免疫组化:NF-B p65、 p-IB、p-IKK蛋白表达,研究方法,2019/4/21,结果与讨论:DAI(疾病活动指数)评分,表3- DAI(疾病活动指数)评分细则,图1-各组小鼠DAI评分,2019/4/21,结果与讨论: NF-B p65,A组在胞质中偶有表达, B组胞质和胞核均呈现强表达, C组在胞质表达, 胞核中也有少许表达, D组胞质和胞核中均有表达, 但弱于B组(图2).,评分B组与C、D组比较差异有统计学意义(P 0.01), C组与D组比较差异有统计学意义(P 0.05),NF-B p65,2019/4/21,结果与讨论: p-IB,2019/4/21,结果与讨论:p-IKK,2019/4/21,结果与讨论,NF- B 相关 NF-Bp65 p-IB p-IKK,DAI评分 降低,1,25(OH)2D3干预,经1,25(OH)2D3干预的小鼠的活动、进食、饮水等一般情况明显优于模型组,干预组小鼠DAI评分明显降低。 经1,25(OH)2D3干预的小鼠结肠组织炎症损伤明显轻于模

      5、型组,同时结肠组织中NF-B、p-IB、p-IKK的表达明显减少。,2019/4/21,结果与讨论,炎症因子刺激,IKK是NF-B 传导通路的关键性激酶,是NF-B 的始动环节。 在炎症反应细胞因子(如TNF)刺激下,激活IKK。,IB有助于将NF- B限制于胞浆内。 IKK使IB 磷酸化并诱导其降解,使NF-B 从复合体中解离后转运至细胞核启动下游基因的转录。,NF-B平时以无活性的状态和IB结合,存在于胞浆中。NF-B二聚体与IB分离后易位至细胞核,在靶基因的启动子或增强子区结合特异的序列。 NF-B 活化后,可增强TNF- 等炎症因子基因转录,使其产生和释放增多,并可 再次激活NF-B。,NF-B平时以无活性的状态和IB结合,存在于胞浆中。,TNF- IL-6,TNF-,LPS, mitogens,virus,2019/4/21,结果与讨论,1,25(OH)2D3干预,p-IKK 表达 提高胞浆中IB 的稳定性,阻止其降解IB 的磷酸化和降解,阻断NF-B活性及NF-B 的蛋白结合活性,p-IB表达 IB将NF- B限制于胞浆内,NF-Bp65表达 活化的NF-B减少,介导的转录降低,炎症因子合成减少,炎症减轻。DAI评分降低。,NF-B平时以无活性的状态和IB结合,存在于胞浆中。 ,IKK(IB激酶)在外界因素刺激下,使IB磷酸化发生降解, NF-B被释放出来。,活化的NF-B进入细胞核与相关DNA结合诱导靶基因转录。,维生素D干预组相较模型组: NF-Bp65 、IB 、IKK,TNF- IL-6,TNF-,LPS, mitogens,virus,结 论,2019/4/21,感谢邱服斌老师、李秀花老师的辛勤指导! 感谢营养教研室各位老师大力支持! 感谢张英师姐的耐心帮助! 感谢各位组员的帮助!,June, 2014,请各位老师批评指正! THANKS!,维生素D通过NF-KB通路对溃疡性结肠炎保护作用,

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