免疫学检验-固相载体ppt课件下载课件
18页1、,三、固相载体 (一)固相载体的要求 理想的固相载体应与抗体(抗原)有较高的结合容量,且结合稳定极少脱落;它可结合抗原或抗体免疫反应物,以及如亲和素或链霉亲和素等大分子蛋白质;生物大分子固相化后仍应保持活性,而且为有利于反应充分进行,最好其活性基团朝向反应溶液;固相化方法应简便易行、快速经济。,,(二) 固相载体的种类和选择 .塑料制品 抗体或蛋白质抗原可通过非共价或物理吸附机制结合到固相载体表面。因材料经济、方法简便、操作及测定易于自动化,迄今用聚苯乙烯制成的小试管、小珠和微量反应板仍是异相酶免疫测定方法最常用的固相载体。,,.微颗粒 此类固相载体系由高分子单体聚合成的微球或颗粒,其直径多为微米(m),由于带有能与蛋白质结合功能团(如NH2、COOH、OH、CHO或NHNH2等),易与抗体(抗原)形成化学偶联,且结合容量大。 .膜载体 包括硝酸纤维素膜(nitrocellulose,NC)玻璃纤维素膜及尼龙膜等微孔滤膜。,,四、免疫吸附剂 免疫吸附剂是指与固相载体结合的抗原或抗体,而将抗原或抗体固相化的过程称为包被(coating)。包被的方法依所用固相载体种类而有不同,可以是非共价
2、键吸附,也可是共价键化学偶联。目前普遍使用的聚苯乙烯固相载体(如 ELISA板)即多采用吸附方式包被抗原或抗体。除固相载体的理化性质外。,,用抗原或抗体包被后,固相载体表面常余少量未吸附位点,可非特异地吸附测定时加入的标本和酶标记物中的蛋白质,导致本底偏高。因此需用15牛血清白蛋白或520小牛血清等包被一次,消除上述干扰,此过程称为封闭(blocking)。包被好的固相载体,加防腐缓冲液在低温可放置一段时间而不丧失免疫活性。,,第二节 酶免疫技术的分类 酶免疫技术是利用酶的高效催化和放大作用与特异性抗原抗体反应相结合而建立的一种标记免疫技术。由于是用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应,因此酶免疫技术一般由二部组成:首先是抗原、抗体之间的一次或数次免疫学反应形成复合物;然后加入酶作用底物,酶标抗原或抗体中的酶即催化其发生呈色反应,而产物的色泽程度与抗原抗体复合物中酶标记物的酶活性相关,因此可以通过测定酶活性来确定待检抗原或抗体的存在或含量。酶免疫技术按实际用途分为酶免疫测定(encymeimmunoassay,EIA)和酶免疫组化两大类。,,(一)异相液相酶免疫测定 此类测定方法主要
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