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血液病项目艾迪康 (2)课件

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  • 上传时间:2019-04-20
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    • 1、血液产品线市场培训 (2012秋季) 全国市场部,背景介绍,血液病是原发于造血系统的疾病,或影响造血系统伴发血液异常改变,以贫血、出血、发热为特征的疾病。,出血性疾病,贫血症,白细胞疾病,常见血液病,造血系统恶性肿瘤,MICM FAB形态学诊断(Morphology) 免疫学检查(Immunology ) 遗传学检查(Cytogenetics) 分子生物学检查(Molecular),检测方法,血液病检测的市场定位,目标对象:医院的血液科,血液肿瘤科,肿瘤科,病理科等与血液肿瘤病相关的科室。 主要针对恶性血液病患者。贫血等良性血液病治疗科室除外 一般治疗恶性血液病的科室都在三级医院 项目专业性特别强,临床和检验技术门槛高,质量是最关键的影响因素。客户对质量的关注度特别高。只要质量稳定可靠,合作稳定性强,对手很难介入。,血液病项目市场分析,重点项目: 骨髓活检:骨髓涂片的补充,需要病理科才能开展,技术要求高。 流式免疫分型:几乎每个患者都需要检测,适用范围广,费用高,技术难度较大。 染色体核型分析:白血病患者的必检项目,耗时长,技术难度大。 分子项目:项目种类最多,医生了解程度最低,医院自

      2、行开展最少。建议主推融合基因筛查、基因重排,预后相关突变。,淋巴造血系统常用诊断技术,形态学: 细胞学:外周血、骨髓涂片,淋巴结穿刺 组织学:骨髓活检、淋巴结活检 免疫学: 流式细胞 遗传学: 核型分析(染色体异常)、荧光原位杂交(FISH) 分子生物学: PCR(RT-PCR) 、DNA测序(突变),MICM分型和诊断,形态或病理或加细胞化学分析受观察者个体经验及分辨力的限制,一致率仅50-70%; 在此基础上增加免疫组化和/或FCM分析大大增加了分型的准确率,可达90%以上; 染色体、FISH及基因分析,进一步提高分型的准确率,MICM整合诊断的临床意义,全面正确诊断与分型 评估预后 确立检测MRD的标志,追踪MRD 帮助建立分层、个性化的治疗 定期追踪帮助发现抗原丢失、克隆演变或突变 帮助确定病因或发病机制,形态学,是诊断的基础,任何淋巴造血系统增生性疾病的诊断都离不开形态学诊断。形态学诊断技术包括 细胞学:外周血、骨髓涂片,淋巴组织穿刺 组织学:骨髓活检、淋巴组织活检 医院一般开展细胞学,组织学需要专门病理技术才能开展,一般都外送,形态学-细胞学-骨髓涂片,形态学保存完好,各系

      3、、各阶段细胞分辨较容易 可能会出现干抽或稀释,影响诊断 不能观察骨髓组织的结构及其全貌。 不易察觉早期的肿瘤细胞浸润。,形态学-细胞学-骨髓活检,常规做HE染色和网织纤维染色及HGE染色。 对细胞密度、组织结构、造血成分的比例及分化情况和间质情况等进行评估,不存在标本稀释问题。 肿瘤、骨髓纤维化、一些疾病的分类,特别是骨髓增生性疾病的诊断非常依赖于骨髓活检。 细胞形态没有细胞涂片保存好。,形态学-骨髓活检常见问题,标本取材条件:要求穿刺1 cm以上骨髓组织 诊断不明确:取材部位是否有病灶 保存液:福尔马林固定,免疫学-流式细胞,淋巴瘤、白血病初诊时诊断及分型 并对预后判断及治疗选择提供参考 可用于微小残留病变的监测,判断疗效 会出现稀释情况,与骨髓增生情况不一致 有专门血液中心实验室的医院会自行开展,但是抗体种类不够齐备,或者MRD项目不开展等情况。可以重点推广MRD检测 康圣达的流式抗体分析不够全面,MRD假阴性较多。,流式细胞常见问题,项目选择:可检测各类血液病(白血病,淋巴瘤骨髓转移),特别适合淋巴系统血液病 抗体数量:20个抗体(有骨髓涂片或临床诊断) 30个抗体(无任何初步诊

      4、断资料) 微小残留检测:6个抗体(有初诊资料并且观察到微小残留跟踪标记),20个抗体(无初诊资料或病情有复发,经过化疗等情况) 临床符合性:一般考虑与形态学的符合性,可以考虑加用遗传学或分子方法确诊,染色体异常 包括染色体的结构和数量异常 根据这些特征性的异常,对恶性血液病进行诊断和分类 由于工作量大,技术要求高, 一般医院都不开展,需要外送。 康圣达在这方面还是有技术优势。,细胞遗传学,急性白血病染色体检测的临床意义,染色体畸变可以作为急性白血病缓解和复发重要参考,最初治疗后异常核型可以消失提示CR,之后重新出现提示白血病复发,有新的核型出现,表明有进展 可以作为标志来验证骨髓移植成功与否 最初诊断的核型是急性白血病预后最有价值指标,急性白血病核型的预后分级,染色体检测常见问题,标本取材量不足:检测最低白细胞数为10的6次方个细胞 培养后无分裂相或分裂相少于15个:标本白细胞量低,患者正在进行化疗 结果临床不符:分子检测阳性而染色体阴性(染色体分辨率低),融合基因 BCR/ABL(P210)-CML/ALL BCR/ABL(P230)-CML BCR/ABL (P190)-ALL P

      5、ML/RARa-M3 AML/ETO-M2 CBF/MYH11X-M4EO MLL重排-M5 FLP1L1-PDGFR-嗜酸细胞增多症 基因突变 JAK-2 V617F /539-543突变 MPL 外显子10突变,血液病类型确诊的分子标志,融合基因筛查,适用患者 本筛查项目主要用于筛查ALL、AML、CML、AMMOL、CMML、MDS等血液病病种可能出现的31种融合基因或癌基因,及其融合基因的110余种剪切变异情况。适合无法确定融合基因类别的初诊患者,便于医生对血液病患者进行分子标志物的确定,并进行后续微小残留病灶的监控。 本项目建议配合染色体核型分析一起检测,以免由于染色体数目异常或携带少见融合基因而造成漏诊。 苏州大学附属第一医院对于初诊ALL,AML患者都建议做此项目,筛查项目组合方案,ALL融合基因筛查(18种) AML融合基因筛查(23种) APL融合基因筛查 MLL融合基因筛查,融合基因筛查,项目优势,融合基因筛查,推广策略 不明诊断患者可推荐31种筛查组套 明确AML或ALL方向患者可推荐小组套 小组套定价不超过1000元 套用融合基因物价,JAK2 基因突变,已列入

      6、WHO2008 MPNs的诊断标准 V617F见于90%以上的PV,约50%的ET、PMF 在PV中,少部分患者为JAK2 Exon12或其它突变 建议JAK2基因突变筛查检测以下几种 V617F; K539L; N542-E543del; E543-D544del,AML患者预后相关分子标志,AML患者的预后评估指标 C-kit突变(8号外显子和17号外显子) NPM1突变 FLT3突变(FLT3-ITD突变和FLT3-TKD突变) CEBPA突变 MDS患者预后 N-RAS突变,10年 OS:69% 化疗复发:33%,10年 OS:37% 化疗复发:50%,10年 OS:11% 化疗复发:78%,预后分层相关基因突变检测,推广策略: 组套推广 组套价格可适当降低,可参照31种融合基因筛查价格,TCR和IgH重排项目,有5-10%的患者无法通过常规方法辨别其淋巴系统的增生是恶性增生还是反应性增生。 正常淋巴细胞在成熟过程中重排是多克隆性的,但恶性肿瘤(98%)表现为单克隆性Ig和/或TCR基因重排。 适用患者及适应症:疑似淋巴瘤患者的良恶性鉴别诊断。淋系白血病患者的鉴别诊断及微小残留

      7、跟踪检测。 目标科室:血液科、肿瘤科、病理科,现有检测方法及相关技术,PCR结合毛细管电泳技术(Genescan): 分辨率高,不易产生假阳性或假阴性 PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,ABL激酶区突变,伊马替尼的长期服用导致部分患者,特别是CML 急变期(AP-CML)的患者,发生伊马替尼的耐药,其耐药发生率在20-30%。耐药主要由ABL激酶区突变引起,可导致药物疗效下降或失效。 适用患者:伊马替尼,尼洛替尼及达沙替尼治疗BCR-ABL阳性CML、ALL患者,建议定期检测,尽早发现耐药。 检测范围:BCR-ABL融合基因ABL激酶区52个位点,ABL激酶区突变与TKI耐药的关系,Sara Redaelli, et. al, JCO, 2009,VOL27(3)469-471,分子检测常见问题,标本取材量不足:检测最低白细胞数为10的6次方个细胞 检测内参偏低:目前原因未知 结果临床不符:分子检测覆盖范围问题,其他情况一般假阴性较少,MICM整合报告,CML的MICM综合诊断,病理形态学 外周血涂片 骨髓涂片 骨髓病理 初诊形态学基础诊断; 治疗中的疗效监测(是否达到形态学CR) 免

      8、疫学 流式细胞术检测 初诊免疫学鉴别确诊及病人残留病灶特征抗原标记确定; 治疗中急变期以及加速期急性白血病快速鉴别诊断 细胞遗传学 染色体核型分析 FISH 初诊CML的确诊(ph染色体); 治疗中急变期以及加速期异常核型演变 分子生物学 RT-PCR 测序 初诊CML的BCR-ABL融合基因基线定量;JAK-2鉴别诊断 治疗中BCR-ABL定量,ABL激酶突变与格列卫耐药,AML的MICM综合诊断,病理形态学 外周血涂片 骨髓涂片 骨髓病理 初诊形态学基础诊断,区分M3; 治疗中疗效监测(是否达到形态学CR) 免疫学 流式细胞术检测 初诊免疫学鉴别确诊及病人残留病灶特征抗原标记确定; 治疗中MRD监测 细胞遗传学 染色体核型分析 FISH 初诊特征染色体核型标志检测,辅助确诊;患者预后分层; 治疗中遗传学缓解程度的监测 分子生物学 RT-PCR 测序 多重PCR 初诊融合基因基线定量;融合基因筛查; AML患者的预后分层突变 治疗中融合基因检测,ALL的MICM综合诊断,病理形态学 外周血涂片 骨髓涂片 骨髓病理 初诊形态学基础诊断; 治疗中疗效监测(是否达到形态学CR) 免疫学 流

      9、式细胞术检测 初诊免疫学鉴别确诊及病人残留病灶特征抗原标记确定; 治疗中MRD监测 细胞遗传学 染色体核型分析 FISH 初诊特征染色体核型标志检测,辅助确诊;患者预后分层; 治疗中遗传学缓解程度的监测 分子生物学 RT-PCR 测序 多重PCR 初诊融合基因基线定量;融合基因筛查;TCR、IgH重排 治疗中融合基因检测;ABL激酶突变与格列卫耐药,CLL的MICM综合诊断,病理形态学 外周血涂片 骨髓涂片 骨髓病理 初诊形态学基础诊断; 治疗中疗效监测(是否达到形态学CR) 免疫学 流式细胞术检测 初诊免疫学鉴别确诊及病人残留病灶特征抗原标记确定; 治疗中MRD监测;ZAP-70(预后分层) 细胞遗传学 染色体核型分析 FISH 初诊特征染色体核型标志检测;患者预后分层; 治疗中遗传学缓解程度的监测 分子生物学 RT-PCR 测序 初诊IgVH突变(预后分层),MDS的MICM综合诊断,病理形态学 外周血涂片 骨髓涂片 骨髓病理 初诊形态学基础诊断,特别是骨髓纤维化状况等; 治疗中疗效监测(是否达到形态学CR) 免疫学 流式细胞术检测 初诊免疫学鉴别确诊及病人残留病灶特征抗原标记确定; AA与MDS鉴别诊断 治疗中MRD监测 细胞遗传学 染色体核型分析 FISH 初诊特征染色体核型标志检测,辅助确诊; 治疗中遗传学缓解程度的监测 分子生物学 RT-PCR 测序 多重PCR 初诊预后分层(N-RAS),MPN的MICM综合诊断,病理形态学 外周血涂片 骨髓涂片 骨髓病理 初诊形态学基础诊断; 治疗中疗效监测(是否达到形态学CR) 免疫学 流式细胞术检测 初诊免疫学鉴别确诊及病人残留病灶特征抗原标记确定; 治疗中MRD监测 细胞遗传学 染色体核型分析 FISH 初诊特征染色体核型标志检测; 治疗中遗传学缓解程度的监测 分子生物学 RT-PCR 测序 多重PCR 初诊特异性分子标记检测(JAK-2,MPL); 治疗中JAK-2,MPL,血液病质量体系建设,与UCLA(加利福利亚大学)签订病理合作协议,建立了远程病理会诊平台,对疑难病例进行会诊研讨和科研.,实验室建设海外专家,艾迪康血液实验室拥有UCLA美国多位专科病理医生为顾问同时与UCLA建立远程病理会诊平台,进行疑难病理会诊。

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