2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》+课件+陈以祥
27页1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数,1、思考:,启示:寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。,热泉,因为热泉温度70800C,淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,科学家要提取耐高温(930C)的DNA聚合酶应去哪里找?,2、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基:,从物理性质看此培养基属于哪类?,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源?,碳源:葡萄糖、尿素 氮源:尿素,这种培养基对微生物的培养有什么作用?,选择作用,只有能分解尿素,以其作为氮源的的微生物才能生长。,这种培养基叫做选择培养基。,培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,5、培养基选择分解尿素的微生物的原理,1、显微镜直接计数:,利用血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,.统计菌落数目:,不能区分死菌与活菌; 不适于对运动细菌的计数; 需要相对高的细菌浓度; 个体小的细菌在显微镜下难以观察;,缺点,2.稀
2、释涂布平板法 原理:在稀释度足够高时,微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的,即一个菌落代表原先的一个单细胞。,每克样品中的菌落数(CV)M 其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml),M代表稀释倍数。,注意事项 为了保证结果准确,一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。 为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中,经涂布,培养计算出菌落平均数。 统计的菌落往往比活菌的实际数目低。,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。,.设置对照:,实例:在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时,A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落,但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。,原因:土样不同,培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质),小结:通过这个事例可以看出,实验结果要有说服力,对照的设置是必不可少的。,方案一:由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二:将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作
3、为空白对照,以证明培养基是否受到污染。,结果预测:如果结果与A同学一致,则证明A无误;如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,二.实验的具体操作 .土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 .制备培养基: 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,应在火焰旁称取土壤10g。 在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁进行,分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因:不同微生物在土壤中含量不同 目的:保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,三样品的稀释,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围相同吗?,原因:土壤中各类微生物的数量(单位:株/kg)是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中:好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万,放线菌数约为477万,霉菌数约为23.1万。 结论:为获得不同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,.取样涂布,实验时要
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