微生物基础知识培训-apr25-2016课件

1、微生物基础知识培训 之猪病篇,汇 报 提 纲,一、微生物种类与基础知识 二、研发和生产涉及猪病微生物的分类 三、微生物鉴别方法 四、微生物的控制与防护,微生物的分类,具有细胞结 构的微生物,原核生物： （由原核细胞构成的） 细胞核无核膜包裹，只存在核区或拟核的裸露DNA的原始单细胞生物,真核微生物 （由真核细胞构成的）,细菌 （球菌、杆菌和螺形菌 ） 放线菌 （孢子，菌丝状） 立克次氏体（呈球状或杆状） 支原体 衣原体,酵母菌 霉菌 真菌（灵芝、蘑菇） 单细胞藻类 原生动物等,没有细胞结构的 微生物：病毒,微 生 物 大 小,病毒0.2 m 杆状细菌0.52.0 m,支原体 立克次氏体 衣原体,0.20.5 m,放线菌菌丝直径 0.52.0 m 霉菌菌丝直径 210m 酵母1-55-30 m,采用过滤除菌的过滤器的孔径应为d0.22m。,细菌,是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体， 是大自然物质循环的主要参与者,1.原核细胞类微生物,大肠杆菌,大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌， 周身鞭毛，能运动，无芽孢。,炭疽杆菌,葡萄球菌,链球菌,弧状菌,四叠球菌,放线菌与

2、人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素（B12）和有机酸等。,放线菌,立克次氏体,是介于细菌与病毒之间,而接近于细菌的一类原核生物。一般呈球状或杆状,是专性细胞内寄生物，主要寄生于节肢动物，有的会通过蚤、虱、蜱、螨传入人体、如斑疹伤寒、战壕热,支原体,为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。 常引起生殖疾病及支原体肺炎,真核细胞类微生物（具有细胞核）,酵母菌和霉菌,酵母菌,霉菌分生孢子,细胞污染霉菌,真菌 显微藻类,原生动物,草履虫,草履虫是一种身体很小，圆筒形的单细胞生物，它只有一个细胞构成，是单细胞动物，雌雄同体。,原生动物门（Protozoa）是动物界的1门，为最原始、最简单、最低等的单细胞动物。,病毒、 类病毒、 拟病毒等,HIV病毒,没有细胞结构的 微生物：病毒,埃博拉病毒,天花病毒,汇 报 提 纲,一、微生物种类与基础知识 二、研发和生产涉及猪病微生物的分类 三、微生物鉴别方法 四

3、、微生物的控制与防护,生产涉及的病毒：圆环病毒、猪瘟病毒、蓝耳病病毒、伪狂 犬病毒、胃肠炎病毒、腹泻病毒。 研发涉及的病毒类：狂犬病毒、乙脑病毒、细小病毒、轮状病 毒。 病毒分类：狂犬病毒、乙脑病毒的强毒为二类病原微生物。 其他为三类病原微生物。 培养方式：细胞转瓶培养,研发和生产涉及猪病微生物的分类,细菌类：副猪嗜血杆菌、猪萎缩性鼻炎、大肠杆菌 病原分类：三类病原微生物 培养模式：发酵罐发酵培养,研发和生产涉及猪病微生物的分类,支原体类：猪肺炎支原体 病原分类：三类病原微生物 培养模式：发酵罐发酵培养,研发和生产涉及猪病微生物的分类,汇 报 提 纲,一、微生物种类与基础知识 二、研发和生产涉及猪病微生物的分类 三、微生物鉴别方法 四、微生物的控制与防护,细菌的鉴别,1、染色法,阳性紫色 阴性红色,细菌的鉴别,2、培养法,细菌的鉴别,3、生化鉴定,细菌的鉴别,4、仪器自动检测,支原体的鉴别 （1）相差显微镜观察 直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。 受污染的细胞在普通倒置显微镜下无特殊的外观表现，

4、培养液也不浑浊；部分敏感细胞生长增殖变慢，细胞变圆脱落。,用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使支原体内的DNA着色，荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。,（2）荧光染色法观察,（3）电镜检测,可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养4872小时，细胞接近汇合前，用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。,扫描电镜法显示支原体，附于细胞表面众多的圆形颗粒为支原体,（4）培养检测,将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基，培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀，然后取0.5ml加入已冷却到50的培养基中，再用琼脂培养基做分离培养，37培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。,（5）PCR检测,引物来自支原体的保守16S-23S的rRNA序列，由于这段spacer的序列随支原体种类不同而不同，因此可依所复制的DNA大小及其特异性片段的大小来作检测及鉴定。,病毒的鉴别方法 1 细胞病变法,细胞肿大,细胞圆缩,形成合胞体,病毒的鉴别方法 2 免疫荧光法,病毒的鉴别方法 3、免疫组化法:取接种后表现异常或死亡动物的各主要

5、脏器,采用免疫组化染色法进行组织病理学检查。,病毒的鉴别方法 4 ELISA IDEXX BVDV抗原检测试剂盒 5 特异性PCR 水疱疹病毒和鼠细胞病毒PCR试剂盒 6 扫描电镜和透射电镜观察病毒颗粒形态,医药原料如抗生素生产，青霉素、链霉素等 维生素生产，维生素C、维生素B、维生素K 转基因技术 疫苗的生产,微生物在医药领域的应用,1.细菌：生产全菌疫苗，亚单位疫苗 2.病毒：生产全病毒疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗 3.支原体：生产全菌体疫苗、亚单位疫苗,微生物在公司疫苗研发中的应用,汇 报 提 纲,一、微生物种类与基础知识 二、研发和生产涉及猪病微生物的种类与特点 三、微生物鉴别方法 四、微生物的控制与防护,为什么要进行微生物控制？,药典对生物制品的要求 微生物可以致病，带入生物制品中，可产生严重危害,人口腔中的微生物,口腔细菌种类超过500种,一个喷嚏喷出的病菌 可高达8500万个,洁净工作服的穿戴 个人卫生（洗手消毒）,目前车间生产的疫苗均为三类病原动物微生物，不感染人，不会对人体产生危害。 研发涉及到少部分人畜共患病疫苗的开发，如狂犬病、乙脑疫苗，直接接触人员要接种疫苗。 如

6、环境中存在的细菌，人员意外刺伤，会有感染细菌的风险。,微生物对人体的危害,常见的刺伤意外事故,将血样标本注入试管中,抽血拔出针头时,动物突然移动时,注射液体抽取过程中,使用过的注射器在丢弃前进行浸泡消毒，这是一个极危险的方法！据统计，非安全注射引起的感染中，有1/3的人是由处理使用过的注射器引起！,收拾实验污物,拆卸一次性注射器再利用 使用后将针头弄弯或用剪刀剪断 用手移去注射器针头 使用双手重新盖帽使用过的针头 运输未盖帽的针头 将针头随意放置在实验台面上,4、使用后、丢弃前损伤,5、裸手操作玻璃吸管,6、用手剧烈拍打细胞瓶（消化细胞时）,7、地面上存在未清理干净的玻璃碎片,防护服 眼部防护 面部防护 手部防护 呼吸防护,个人生物安全防护,生物安全防护服 在实验室工作时，任何时候都必须穿着工作服、洁净服、无菌服、隔离服或正压服。,眼部防护 护目镜,图1a.安全镜,图1b.护目镜,眼睛防护 紧急洗眼装置,便携式洗眼装置,固定式洗眼装置,面部防护,防护面罩,防护口罩,一次性面罩,手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚脂类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物危害物质的防护,手部防护,乳胶手套,聚脂手套,聚氯乙烯手套,一次性防毒面具,半罩式防毒面具及其佩戴方式,呼吸防护 简易式防毒面具,全罩式防毒面具及其佩戴方式,呼吸防护 全罩式防毒面具,呼吸防护 正压防护服,谢 谢！,

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