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动物细胞工程-幻灯片

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常见问题

1、2.2 动物细胞工程,“温故知新”,1.植物细胞工程常用的技术手段有哪些？,植物组织培养、植物体细胞杂交,原生质体A,原生质体B,原生质体融合,正在融合的原生质体,再生出细胞壁,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,纤维素酶果胶酶,物理方法化学方法：,离心振动电刺激,聚乙二醇(PEG),植物组织培养,植物细胞融合,过程：,意义？,克服不同生物远源杂交不亲和的障碍！,原理？,细胞膜的流动性和细胞的全能性。,再分化,融合完成的标志,2.动物细胞工程常用的技术手段有哪些？,动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体,其他动物细胞工程技术的基础,“动物细胞培养发展历史”,20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。,1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。,哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家

2、的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。,问题讨论:,取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后构建人造皮肤再移植。,烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？,图2-15 用培养的人细胞构建的人造皮肤,一、动物细胞培养,动物细胞培养就是从动物机体内取出，将它分散成，然后，放在适宜的中，让这些细胞。,相关的组织,单个细胞,培养基,生长和增殖,1.概念：,2.原理：,细胞的增殖,一、动物细胞培养,3、过程：,1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？,“想一想”,胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛,2、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？,没有,3、动物细胞培养过程是否将组织分散成单个细胞了呢？,是,单个细胞的获取,、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？,、胰蛋白酶有什么作用呢？由此可说明细胞间的物质主要是什么成份？,、细胞膜的主要成份是什么？,剪刀剪碎,然后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理,胰蛋白酶水解蛋白质,蛋白质和磷脂,

3、单个细胞的获取,、胰蛋白酶对细胞有损伤作用吗？,、既然胰蛋白酶对细胞有损伤作用，那将动物组织分散成单个细胞时我们应该注意什么问题呢？,有,注意时间的控制,、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？,不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2-7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。,单个细胞的获取,细胞悬浮液的制取,制成细胞悬液,用胰蛋白酶处理分散成单个细胞,如何制取细胞悬浮液呢？,用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬浮液,细胞的原代培养,人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。,细胞贴壁：,悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,1.动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？,培养贴壁性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能够生长增殖,接触抑制：,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。,2.在动物细胞培养过程中为何将组织分散成单个细胞的呢？,成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖,疑问？,细胞在原代培养时，发生了细胞接触抑制现象，而此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办呢？,将贴满瓶壁的细胞用

4、胰蛋白酶处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。,传代培养,细胞的传代培养,不都能,发生突变，朝着癌细胞方向发展,不是,保存10代以内的细胞，因为1050代部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,单个细胞,细胞悬浮液,动物细胞培养过程,多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据我们所学知识，思考并讨论以下问题： 1、体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2、体外培养的细胞需要什么样的环境条件？,问题探讨,二、细胞培养的条件,1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等） 3、温度和pH 36.5+（-）0.5 ，PH为 7.2-7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,三、动物细胞培养技术的应用,1、大规模生产蛋白质生物制品 2、为烧伤病人提供可供移植皮肤 3、用于检测有毒物质 4、为基因工程提供受体细胞 5、用于科学研究,2.2 动物细胞工程,二、细胞培养的条件,三、动物细胞培养技术的应用,单个细胞的获取,细胞悬浮

5、液的制取,细胞的原代培养,细胞的传代培养,一、动物细胞培养,1、概念：,2、原理：,细胞的增殖,3、过程：,概念图,细胞工程,“练一练”,1在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（） A. 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等 C. 动物细胞培养只能传50代左右，所培育的细胞会衰老死去 D. 动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理 2用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（） A. 容易产生各种变异 B.具有更强的全能性 C. 取材十分方便 D.分裂增殖的能力强,随堂练习,3.右图是动物细胞培养的基本示意图。请据此回答。 (1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自。 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目是。 (3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为。 (4)在C瓶中正常培养了一段时间，发现细胞全部死亡。原因是。,动物胚胎或幼龄动物的器官或组织,剪碎,胰蛋白,使每个细胞能与培养液接触,动物血清,10,原代培养,细胞没有发生癌变,

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