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临床标本的细菌学

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  • 卖家[上传人]:F****n
  • 文档编号:88110358
  • 上传时间:2019-04-19
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    • 1、临床标本的细菌学鉴定1 (综合性实验),教学目的和要求,熟悉临床标本一般细菌鉴定的流程 掌握化脓性球菌的鉴定方法 掌握肠道细菌的鉴定方法 掌握球菌及肠道杆菌的生物学特性,加强与临床实践的联系,从“对已知细菌的认知”到“未知细菌鉴定”。 锻炼学生发现问题,分析问题,解决问题的能力。 培养学生灵活运用基础知识和基本技能的能力。,要求,目的,本次实验内容,临床标本细菌学鉴定的方法及一般程序 血液标本的细菌检测(1) 粪便标本的细菌检测(1) 病原性球菌生物学特性,内容一: 临床标本细菌学 鉴定的方法及一般程序,细菌的鉴定依据,形态学特性: 形状、排列、染色性、特殊结构 生理特性: 菌落特征(鉴别培养基)、 溶血现象(血平板), 细菌的生化反应(鉴别培养基) 抗原: 细菌的致病性:,方法,革兰染色,培养,抗原抗体反应,动物实验,增 菌,接种平板培养基,分离单个菌落,各种鉴定试验,涂片染色,快速诊 断试验,生化试验,血清学实验,涂片染色,药敏试验,动物试验,初步诊 断报告,细菌学检验的一般程序,挑取可疑菌落,标本,内容二:临床标本细菌学检查,血液标本的细菌学检测 血液标本为无菌标本,鉴定出细菌即

      2、有诊断意义 血液标本中常见致病菌 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌 乙型溶血性链球菌、甲型溶血性链球菌、 肺炎链球菌、 脑膜炎奈瑟菌 铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌、厌氧菌等,革兰染色:染色性及排列 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象普通平板(示教) 菌落黄色(有时黄色不典型) 菌落白色或柠檬色,病原性球菌的生物学特性,怎么区分?,金黄色葡萄球菌: 溶血毒素:溶血环 血浆凝固酶:,表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环,金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 溶血,在血平板的生长现象(示教),鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 原理:凝固酶可催化: 血浆中的纤维蛋白原 纤维蛋白血浆凝固 方法(见实验指导16页) 在抗凝血浆中加入菌液, 37 3小时 结果:金黄色葡萄球菌(阳性) 表皮葡萄球菌(阴性),血浆凝固酶试验(示教),病原性球菌的生物学特性,链球菌在血平板上的生长现象(示教):,溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌,溶血,菌落灰白色、细小 溶血,菌落灰白色、细小 溶血,菌落灰白色、细小,肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验(示教),胆汁溶菌试验(见实验指导18页)

      3、 肺炎球菌(阳性)、 甲型溶血性链球菌(阴性) 菊糖发酵试验(见实验指导18页) 肺炎球菌(阳性)、 甲型溶血性链球菌(阴性),病原性球菌的生物学特性,脑膜炎奈瑟菌在巧克力色培养基(示教): 专性需氧,5%CO2 菌落无色透明、细小,露珠状,病原性球菌的生物学特性,血平板上的病原性球菌生长现象的区别要点:,表皮葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌,溶血,菌落白色或柠檬色 溶血,菌落黄色、较大 溶血,菌落灰白色、细小 溶血,菌落灰白色、细小 溶血,菌落灰白色、细小,分离培养,血浆凝固酶 发酵甘露醇 耐热核酸酶,直接涂片镜检:,革兰阳性、葡萄串状排列。,生长现象,色素,溶血,,生化反应,葡萄球菌,金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的区别,分离培养:,溶血,直接涂片镜检:,革兰阳性、链状排列,特征!,生长现象,菌落特征, 溶血!,生化反应,链球菌: 乙型链球菌、甲型链球菌、肺炎链球菌的区别,溶血,乙型链球菌,甲型链球菌与肺炎链球菌,乙型链球菌,葡萄球菌属,血液标本,血平板分离培养,革兰染色,染色性 形状排列,初步诊断,溶血现象、革兰染色,甲型链球菌或 肺炎链球菌,

      4、血浆凝固酶试验,(+),(),金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,胆汁溶菌试验 菊糖发酵试验,(+),(),肺炎链球菌,甲型链球菌,内容二:粪便标本细菌学检查,粪便标本:为有菌标本,在标本中分离、并鉴定出致病菌才有诊断意义。 粪便标本中常见正常菌群:大肠埃希菌 致病菌:痢疾杆菌、伤寒杆菌,痢疾杆菌,伤寒杆菌,大肠杆菌,大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌生物学特征比较,含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等,大肠埃希菌,沙门菌 志贺菌,胆盐、煌绿:抑制大肠埃希菌及G+菌, 提高肠道致病菌检出率,肠道选择鉴别培养基:SS培养基(沙门志贺培养基),SS琼脂平板(下次实验课示教) 基础性成分:牛肉膏,蛋白胨,琼脂 抑制性成分:硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群生长 鉴别性成分:乳糖分解产酸 指示性成分:中性红酸碱指示剂产酸变红,发酵乳糖的菌落,不发酵乳糖菌落,可疑的致病菌,大肠杆菌,无色、半透明、光滑、较小,观察指标:葡萄糖、乳糖发酵、H2S、动力,上层固体斜面:乳糖+指示剂,下层半固体:葡萄糖+指示剂+FeSO4,挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基,半固体双糖铁培养基培养结果 (

      5、下次实验课示教),未接种管,痢疾杆菌,大肠埃希菌,粪便标本,SS平板分离培养,革兰染色,菌落颜色、革兰染色,伤寒杆菌或痢疾杆菌,大肠埃希菌,伤寒杆菌,半固体双糖铁培养基,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象; 注意观察菌落特征 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、(甲、乙)型溶血性链球菌及肺炎球菌在血平板的生长现象; 注意观察菌落特征、溶血环 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌胆汁溶菌试验 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌菊糖发酵试验 脑膜炎双球菌在巧克力血平板的生长现象 注意观察菌落特征,本次实验的示教,实验材料: 每组一套标本,编号1号-8号 每人1个(注意勿污染,下个班还用) 每人1块平板(SS平板或血平板) 操作1:临床标本的分离培养(分区划线) 血液标本:接种血平板 粪便标本:接种SS平板 操作2:标本的革兰染色(初步诊断) 操作3:无菌分装培养基(下次实验用),本次实验的操作,做标记! 班级姓名,观察临床标本的分离培养物 血平板:观察溶血现象,菌落颜色 SS平板:观察菌落颜色 鉴定:挑取可疑致病菌菌落进一步鉴定 挑取可疑致病菌涂布做革兰染色 明确诊断 示教:肠道杆菌生化试验,下次实验内容,

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