临床血液学检验技术第四章红细胞检验技术
94页1、第四章 红细胞检验技术 第五节 第八节,WHO? 金喜善 HA,地点:夜班急诊室医生工作站 砰的一声,门外护士急匆匆地领进来一家3口,患病的是小男孩,一岁半,面色惨白如纸,神情极度疲倦。没有哭闹,没有挣扎,连眼皮都不抬一下。家长告知孩子昨天发高烧,便自行跑到药房买退烧药给孩子吃。问吃了哪种药?正是尼美舒利。 立即给孩子氧,抽血送检验科加急检查,血红蛋白只有 22 g/L。孩子溶血,检验的难度增大。等待血型鉴定的时间显得格外漫长。检验科的血型检测出来A 型! 输注 A 型洗涤红细胞悬液。孩子终于度过了重重难关。我们从死神手里抢回来了孩子的生命。,溶血一般检验 铁代谢检验 叶酸和维生素B12检验 红细胞膜缺陷的检测 红细胞酶缺陷的检验 免疫性溶血性贫血检验 血红蛋白异常的检验 阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验,第五节 红细胞酶缺陷的检验,G6PD荧光斑点试验和活性测定 丙酮酸激酶荧光点试验和活性测定 高铁血红蛋白还原试验 变性珠蛋白小体生成试验 谷胱甘肽还原酶缺陷检测 G-6-PD基因检测,原理: G6PD 使NADP还原成NADPH, 后者在紫外线照射下发出荧光 (260365nm) ; N
2、ADPH在340nm处有一吸收峰,可通过单位时间生成的NADPH的量,计算G6PD活性。 参考值: 正常人强荧光; Chapman-Dern法酶活性2.8 7.3I U/gHb,一、G6PD荧光斑点试验和活性检测,G6PD荧光斑点试验和活性检测,荧光斑点适用于筛查; 活性测定对G6PD缺陷诊断有较高特异性和灵敏度 WHO推荐Zinkham法 新生儿血和网织红细胞酶活性较高 溶血发作期酶活性增高,二、高铁血红蛋白还原试验(MHb-RT),原理: 亚铁Hb 高铁Hb RBC中的G6PD含量正常时,己糖旁路形成的NADPH作为MHb还原酶的辅酶,在递氢体-美蓝参与下,可使MHb还原为亚铁血红蛋白 G6PD缺乏,则MHb不能还原 本法仅作为过筛试验,其特异性和敏感性均不高, 条件时应直接测定G6PD活性。,亚硝酸盐,临床意义: =75%正常人 (脐带血=77 % ) 31%74% 中间反应型(杂合子) 30% G6PD显著缺陷(半合子或纯合子),三、变性珠蛋白小体生成试验,又称 红细胞包涵体、Heinz小体、海因小体 原理:G-6PD缺乏致红细胞内GSH减少,高铁血红蛋白增高,形成变性珠蛋白小
3、体,沉着红细胞膜上 本法仅能作为过筛试验,抗凝血+乙酰苯肼,37温育24h,充分氧化,Hb氧化成Heinz小体(结晶紫、甲紫或煌焦油兰),1. 正常人 30% 2. G6PD缺陷症、不稳定Hb、HbH病等常高于45%,结果:小体为圆形或多角形色涵体,多位于红细胞边缘,以含5个以上小体的红细胞计数,第五节 红细胞酶缺陷的检验,G6PD荧光斑点试验和活性测定 丙酮酸激酶荧光点试验和活性测定 高铁血红蛋白还原试验 变性珠蛋白小体生成试验 谷胱甘肽还原酶缺陷检测 G-6-PD基因检测,铁指标的检验 叶酸和维生素B12的检验 溶血的检验 红细胞膜缺陷的检测 红细胞酶缺陷的检验 血红蛋白异常的检验 阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验 免疫性溶血性贫血检验,第六节、免疫性溶血性贫血的检验,抗人球蛋白试验 冷凝集素试验 冷热溶血试验,一、抗人球蛋白试验,临床意义: 1)AIHA重要指标 直接试验(+) 间接试验(-) 2)其他:如冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血、PNH等直接试验(+) 3)新生儿同种AIHA Rh血型不合者直接、间接(+) ABO血型不合者(-),二、冷凝集素试验,冷凝集素综合症患者血
4、清中存在冷凝激素(IgM),在低温(0 4)时使自身红细胞、O型红细胞或受检者同型红细胞发生凝集,当温度上升(37)后凝集现象消失。,缗钱状分布红细胞,成熟红细胞随机呈块状或束状聚集,主要表现 1.多种抗体暴露; 2.HA(自身免疫性); 3.非典型肺炎; 4.金葡菌感染; 5.冷凝集疾病。,三、冷热溶血试验,阵发性寒冷性血红蛋白尿征患者体内含有寒冷性溶血抗体(IgG),在4条件下作用于自身红细胞后,即吸收补体造成溶血。将病人的血清置于冰箱中一些时间,再置于室温中,可出现溶血现象。这种先在低温时结合抗原并固定补体,在37时才表现溶血的抗体,又叫“双相抗体”(D-L抗体) 过筛试验,第六节、免疫性溶血性贫血的检验,抗人球蛋白试验 冷凝集素试验 冷热溶血试验,溶血一般检验 铁代谢检验 叶酸和维生素B12检验 红细胞膜缺陷的检测 红细胞酶缺陷的检验 免疫性溶血性贫血检验 血红蛋白异常的检验 阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验,第七节 血红蛋白异常的检验,抗碱血红蛋白检测 HbF酸洗脱法检测 红细胞包涵体试验 异丙醇沉淀试验 血红蛋白电泳 PCR技术检测血红蛋白基因,一、抗碱血红蛋白检测,HbF抗碱
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