2017-2018学年同步备课套餐之生物北师大版选修1课件:第1章 第3课时
44页1、第3课时 微生物数量的测定,第1章 微生物技术,学习导航 1.阅读教材P17内容,概述测定某种微生物数量的方法和步骤。 2.结合教材P1517“测定土壤中微生物的数量”实验,掌握使用平板菌落计数法测定土壤中微生物的数量。 重难点击 1.掌握测定某种微生物数量的方法和步骤。 2.学会使用平板菌落计数法测定土壤中微生物的数量。,一、微生物数量测定的方法和原理,二、土壤中尿素分解菌数量的测定,内容索引,当堂检测,一、微生物数量测定的方法和原理,基础梳理,微生物数量的测定也是重要的微生物技术之一,平板菌落计数法是一种应用广泛的微生物数量测定方法。 1.平板菌落计数法的原理:根据微生物在高度稀释的条件下, 培养基上所形成的单个菌落,是由 繁殖而成的,即一个菌落代表 。 2.计算方法:从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是:同一稀释度的菌落平均数0.2稀释度10。,固体,一个单细胞,一个单细胞,3.优缺点 (1)优点:能测出样品的 数,可用于微生物的选种与 、分离纯化及其他方面的测定。 (2)缺点:操作烦琐、时间较长、测定值常受各种因素的影响。 4.该方法统计的菌落数比活菌的实际数目
2、低,这是因为_ 。,活菌,育种,当两个或多个,细胞在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,1.为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度? 答案 土壤中各种微生物的数量是不同的,为获得不同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离。,问题探究,答案,答案,2.平板菌落计数法 (1)平板菌落计数法根据操作步骤的不同可分为哪两种? 答案 涂布平板法:用灭过菌的涂布器将一定量(一般为0.1 mL)的适当稀释过的菌液涂布在琼脂培养基的表面,然后保温培养直到菌落的出现。记录菌落的数目并换算成每毫升样品中的活细胞的数量。 倒平板法:将已知体积(0.11 mL)的适当稀释过的菌液加到灭过菌的培养皿内,然后倒入溶化后冷却至45 的琼脂培养基,水平晃动混匀,待凝固后保温培养到出现菌落,然后与涂布平板法同样计数。,(2)平板菌落计数法中换算样品的含菌数依据什么数据换算? 答案 依据稀释倍数、取样接种量和菌落数。 (3)每隔多少小时统计一次菌落数目?应选取菌落数目何时(稳定时或不稳定时)的记录作为结果? 答案 每隔24小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。 (4)统计菌落时,要求细菌和放线菌每
3、皿的菌落数目范围是多少?霉菌每皿的菌落数目范围是多少? 答案 若测定细菌和放线菌,要求每皿以30300个菌落为宜,若是霉菌则以每皿10100个菌落为宜。,答案,归纳总结,要使平板菌落计数法准确,需要掌握的关键步骤有:严格的无菌操作,否则容易被杂菌污染;稀释液要充分混匀,吸量准确,否则结果不准确;多做几个重复实验,减少误差。,拓展应用,1.用平板菌落计数法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数,最接近样品中菌体数真实值的是 A.菌落数量最多的平板 B.菌落数量最少的平板 C.菌落数量适中的平板 D.取若干个平板菌落数量的平均值,答案,解析,解析 用平板菌落计数法对样品中活菌数目进行统计,只是一种估测,根据此方法的实验过程可知,在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有一定的偶然性,并不是绝对均匀,所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值。,2.若某一稀释度下,平板上生长的平均菌落数为80,涂布平板时所用的稀释液体积为0.1 mL,稀释液的稀释倍数为106,则每克样品中的活菌数约为 A.8108 B.8107 C.8105 D.8106
4、 解析 每克样品中的活菌数(800.1)106。,答案,解析,二、土壤中尿素分解菌数量的测定,基础梳理,土壤中含有种类繁多的微生物,不同微生物的数量有差别,我们通过实验来测定土壤中尿素分解菌的数量。 1.下面是土壤中尿素分解菌培养使用的培养基的配方,请分析:,(1)在该培养基配方中,为微生物的生长提供碳源的是 ,提供氮源的是 ,琼脂的作用是 。 (2)微生物要利用尿素需要分泌脲酶,不能分泌脲酶的微生物不能利用尿素。因此该培养基对微生物具有选择作用,其选择机制是_ 。,酵母粉,尿素,凝固剂,只有能够分泌脲酶从,而以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长,(3)细菌合成的脲酶分解尿素产生了氨,使培养基的碱性增强,pH上升,使酚红变色,菌落周围变 。可用来鉴定选出的菌落是不是尿素分解菌。,红,2.结合下图分析实验过程和注意事项,尿素,选择,对照,选择作用,10,90,1,9,火焰,104,105,106,标记,稀释度,45,菌液和,培养基,37,多于,稳定,30300,3,平均值,1.试写出测定土壤中尿素分解菌数量的实验流程。 答案 制备尿素固体培养基制备土壤样品稀释液加样倒平板培养统计菌
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