胸腹水RNA富集提取详细操作步骤
1页胸腹水RNA富集提取详细操作步骤(biog为例)操作步骤1.请自行准备:无水乙醇、1.5mL离心管、2.0mL离心管。2.取出析出液和洗涤液,按以下操作:a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇;9mL加入51mL无水乙醇。b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37溶解,摇匀后使用。3.取2.0mL离心管1支,依次加入1mL血清/血浆样本、100L溶液E、700L溶液Q,上下颠倒混匀,室温/4静置20分钟。4.12,000 rpm 4离心5分钟,弃上清,收集离心管内沉淀。5.向沉淀中依次加入200L裂解液、4L RNA Carrier、及20L消化液,漩涡震荡至沉淀完全分散,56水浴10 分钟。6.加入500L析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。7.将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2 min,12,000 rpm 4离心1 min,弃收集管内废液。8.将吸附柱放回收集管内,加500L 洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 4离心1 min,弃收集管内废液。9.将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4离心2 min,离去残留的洗涤液。10.取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 L 洗脱液,静置3 min,12,000 rpm 4 离心2 min,收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-20保存。
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