药物分析：药物的含量测定

1、药物的含量测定,2018/12/10,2,本章要求,熟悉药物及其制剂的含量限度表示方法 掌握容量分析法的特点、原理与含量计算方法 掌握UV法测定药物含量的原理、测定方法与计算 掌握HPLC法和GC法的系统适用性试验、含量计算 熟悉常用HPLC、GC色谱柱、检测器、条件的选择 熟悉药物含量测定分析方法的验证实验 了解荧光分光光度法和原子吸收分光光度法的应用,2018/12/10,3,评价药品质量的三种分析手段： 鉴别（identification） 检查（test for purity） 含量测定（assay）,准确测定有效成分的含量,优劣度,第一节 概述,含量测定（assay）理化方法测定 效价测定（assay of potency）生物学方法或 酶学方法测定,原料药：强调方法的精密度、准确度 制剂：偏重方法的选择性,2018/12/10,4,含量限度的表示方法,原料药：以百分含量表示（一般以干燥品计）,地塞米松磷酸钠 按干燥品计算，含C22H28FNaO8P应为96.0%-102.0%。 硫酸庆大霉素 按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。 阿司匹林含C9H6O4不

2、得少于99.5% 氢氧化铝含氢氧化铝按Al2O3计算，不得少于48.0。,例子,101.0%,干燥失重测定,水分测定,2018/12/10,5,以标示量%表示 直接用%含量规定范围 以重量规定含量范围,标示量=规格量=处方量 例：维生素B1注射液含维生素B1 应为标示量的95.0%105.0%,例：复方碘溶液 含 I 应为4.50% 5.50% 含 KI 应为9.5% 10.5%,例：复方磺胺甲噁唑片 磺胺甲噁唑 0.3600.440g /片 甲氧苄氨嘧啶72.088.0mg /片,制剂：按标示量计算（一般以干燥品计）,2018/12/10,6,常用含量测定方法(2005年版ChP）,2018/12/10,7,特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但是灵敏度低，专属性差 通常用于高含量和中含量的原料药物 (只要求准确度和精密度) 滴定方式：,直接滴定法 剩余滴定法 置换滴定法,7,第二节 容量分析法（滴定）,2018/12/10,8,滴定类型： 关键问题：滴定终点的把握 被测物与滴定液定量关系 滴定液消耗的体积,酸碱滴定法 非水滴定法 氧化还原滴定法（碘量法） 溴量法,反应的化学计量点

3、,指示剂显示的滴定终点,2018/12/10,9,直接滴定法 含量,含量的计算,2018/12/10,10,定量关系： aA bB 被测药物 滴定液,化学计量关系 nA/ anB/ b WA/ aMAWB/ bMB,2018/12/10,11,滴定度：1mL某物质的量浓度的滴定液相当于被测药物的重量，中国药典用mg表示。 滴定度的计算：,T滴定度(mg/ml) c滴定液浓度(mol/L) M被测物质分子量,2018/12/10,12,以I2（0.05mol/l）计，反应摩尔比 11,例子,2018/12/10,13,浓度校正因子F：实际工作中配制的滴定液浓度与药典中的规定浓度不一致，须对滴定液浓度校正 含量计算公式,含量 100,F,含量,2018/12/10,14,剩余滴定法 加入滴定液A 与被测药物完全反应，再以滴定液B 回滴剩余的滴定液 A 滴定液A 与滴定液B 的浓度是相当的，根据消耗回滴的滴定液体积进行计算 本法需进行空白试验校正,含量 100,2018/12/10,15,称取异烟肼约0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取25mL，加水50 m

4、L与盐酸20 mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)缓缓滴定至粉红色消失。 已知：异烟肼取样0.2545g ， 消耗溴酸钾滴定液(F=1.005) 18.30mL，每1mL溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）相当于3.429mg异烟肼。,百分含量%=V TF/ W100%,例子,2018/12/10,16,取阿司匹林约0.3g，精密称定（0.2908g），加中性乙醇20ml溶解后，精密加入0.1mol/L NaOH40ml，置水浴中加热煮沸15分钟，放冷，用0.05mol/L H2SO4滴定至终点，同时用空白试验进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于18.02mg阿司匹林。,已知：供试品消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 23.84ml，空白试验消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 39.88ml。,百分含量%=(V0-V) TF/ W100%,例子,2018/12/10,17,原料药百分含量 制剂标示量百分含量,片剂：每片含量相当于标示量的%,每g实际含量,区分,每mL实际含量,注射剂：每mL含量相当于标示量的%,片粉重

5、,注射液体积,2018/12/10,18,取阿司匹林片10片，称总重，研细后称取适量，精密称定，加中性乙醇20ml后，迅速用0.1mol/L NaOH滴定至终点 。精密加入0.1mol/L NaOH40ml，置水浴中加热煮沸15分钟，放冷，用0.05mol/L H2SO4滴定至终点，同时用空白试验进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于18.02mg阿司匹林。,例子,已知：10片重3.0840g，取片粉0.2908g，供试品及空白试验分别消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L） 23.84ml、 39.88ml，规格0.3g/片,标示量 100,2018/12/10,19,利用物质的光谱特性进行定量 （吸光度、发光强度与浓度成正比关系）,紫外可见分光光度法 荧光分光光度法 原子吸收,紫外吸收光谱图,第三节 光谱分析法,2018/12/10,20,波长范围200760nm 定量分析基本原理：朗伯-比尔定律 A=ECL 特点：灵敏度高(10-410-7 g/mL)； 准确度高； 仪器便宜；易操作 专属性稍差,紫外可见分光光度法,2018/12/10,21,（一）对溶剂的要求

6、列出名称、A尽量小,（二）溶剂空白试验 校零,（四）测定波长确证 2nm,（三）供试液的浓度 A=0.30.7,吸收度的测定要求,2018/12/10,22,测定方法 对照品比较法:配制供试品溶液和对照品溶液， 相同条件下测定吸收度 C供试C对照 要求：对照品与供试品溶液中的被测成分浓度应一致（标示量的 10%）,含量 100,=,标准曲线法（多点对照） 绘制对照液浓度吸光度标准曲线（至少5点） 拟合回归方程，求出供试液浓度,标准曲线,吸收系数法（不需要对照品） 测定处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数计算（E值小于100的一般不宜采用）,含量 100,=,2018/12/10,25,例子,2018/12/10,26,制剂标示量百分含量,片剂：g/片,区分,注射剂：g/mL,V注射,2018/12/10,27,维生素B12注射液规格为0.1mgm1，含量测定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，混匀，置lcm石英池中，以蒸馏水为空白，在3611nm波长处吸收度为0.593，按 为207计算维生素B12按标示量计算的百分含量为,例子,2018/12/10

7、,28,计算分光光度法 多波长校正计算分光光度法,双波长分光光度法（复方磺胺类药物的测定） 三波长分光光度法（维生素A的测定） 导数光谱法 解联立方程法,2018/12/10,29,比色法 加入适当显色剂显色后可见波长处测定,酸性染料比色法 （硫酸阿托品片） 四氮唑比色法、异烟肼比色法 Kober反应法 （甾体激素类药物） 蛋白质的双缩脲反应 （硫酸软骨素的测定） 总黄酮、总生物碱的测定（中药制剂）,2018/12/10,30,测定的是物质分子的发射光谱 定量分析：物质的低溶液浓度 荧光（发射光）强度 特点：灵敏度高(10-1010-12 g/mL)； 专属性好 适于低浓度溶液分析（自熄灭） 干扰因素多（空白试验） 衍生后测定（利血平）,荧光分光光度法,正比关系,2018/12/10,31,药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄，故(RxRxb)/(RrRrb)应在0.52,测定方法 对照品对照法:配制供试品溶液和对照品溶液， 相同条件下测定两者及其空白的荧光强度,测定前，常用基准溶液（硫酸奎宁、蓝色荧光）校正仪器灵敏度,2018/12/10,32,测定呈原子状态的金属元素和部分

8、非金属元素 定量分析：测定该特征谱线辐射光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量 特点：灵敏度高、专属性好 测定方法：标准曲线法、标准加入法,原子吸收分光光度法,2018/12/10,33,特点：高灵敏度、高专属性、分析速度快 适用于药物制剂或复杂样品 高效液相色谱法（HPLC） 气相色谱法（GC）,第四节 色谱分析法,分离分析方法,2018/12/10,34,绝大部分药物,2018/12/10,35,固定相、流动相及检测器的选择 常用系统（反相体系RP-HPLC） 固定相：非极性色谱柱 流动相：极性溶剂 检测器：紫外吸收检测器 适用于中等极性、弱极性的药物,高效液相色谱法,2018/12/10,36,应用情况,HPLC法是药物制剂、多组分样品分析的首选方法，是各国药典收载的方法中应用最广的方法 在原料药的含量测定中，HPLC法主要用于多组分抗生素或生化药品，或因所含杂质干扰测定的化学品种。如： 庆大霉素的组分测定，-内酰胺类、大环内酯类、四环素类等抗生素 甾体激素类药物,2018/12/10,37,色谱柱：十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图,蒲 公 英 图,37,2018/12

9、/10,38,分析型色谱柱,最常用：C18/ODS、C8,内径：4.6mm 长度：15mm、25mm 柱填料粒度：210m pH：28,2018/12/10,39,流动相：极性溶剂,过滤脱气 多元体系,2018/12/10,40,流动相选择,调洗脱力强弱：四氢呋喃乙腈甲醇水 用过缓冲盐或酸碱流动相后，色谱柱必须用低浓度甲醇溶液冲洗，再用甲醇冲洗,例如,乙腈（30）,乙腈-水(15:15),乙腈-四氢呋喃(15:15),2018/12/10,41,灯 室,流通池,检测器 紫外检测器（UVD 最常用）、二极管阵列（DVD）、以及荧光、电化学、示差折光、蒸发光散射（ELSD）和质谱检测器（MS）,紫外检测器外观图,2018/12/10,42,系统适用性试验,理论板数（n） 分离度（R） 重复性（RSD） 拖尾因子（T）,用规定的对照品对仪器进行试验和调整,2018/12/10,43,1）色谱柱的理论板数（n） n值越大柱效越高，应高于规定的最小理论板数,tR 保留时间,Wh/2 半高峰宽,2018/12/10,44,2）分离度（R） R值越大分离效果越好 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度，应大于1.5。,2018/12/10,45,3）重复性 考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样35次，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0。,系统的精密度： 每次开机后，首先要做的日常工作，不能作为分析方法学研究中的精密度试验,2018/12/10,46,例题 取某对照品溶液10l，连续进样5次，记录各次色谱峰峰面积如下，试判断色谱系统重复性是否符合规定。,X=19898.1 S=586.789 RSD=2.9% 不符合规定,

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