浅析肝癌抗原肽(epvtkaeml)与人hsp70融合基因的构建及原核表达
9页1、从本学科出发,应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性,便于研究生提出新见解,特别是博士生必须有创新性的成果浅析肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达 【摘要】 目的: 构建及原核表达肝癌抗原肽与人热休克蛋白70的融合基因。方法: 采用加端PCR方法, 将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3端; 将融合基因克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)/EPVTKAEMLHSP70。经限制性内切酶BamH I、 Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化 BL21, 经IPTG诱导表达融合蛋白, SDSPAGE检测表达结果。结果: 应用加端PCR方法扩增出约 kb的目的片段, 序列测定结果证实, EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3端。经BamH I、 Xho I酶切鉴定证实, 融合基因成功地克隆到原核表达载体pET28a(+)上; 转入重组质粒的 BL21经IPTG诱导后, SDSPAGE分析发现在相对分子质量约7XX处有表达量明显增多的蛋白条带。结论: 成功地
2、构建并表达了肝癌抗原肽与人HSP70的融合基因。 【关键词】 肝肿瘤/免疫学 抗原 肿瘤/遗传学 表位 热休克蛋白类70/遗传学 基因表达 Abstract AIM: To construct and express a fusion gene of human heptoma peptide (EPVTKAEML) with human heat shock protEin0 (HSP70). METHODS: A cDNA fragment encoding EPVTKAEML was added to terminus of human HSP70 gene by PCR amplification. The PCR products of fusion gene were cloned into pET28a(+)vector. The recombinant plasmid pET28a(+)/EPVTKAEMLHSP70 was identified by enzyme digestion analysis and sequencing, and then it was t
3、ransformed into BL21(DE3) through IPTG induction to express the target protein bearing His tag. RESULTS: A fragment of kb was amplified by PCR. Sequence analysis revealed that the sequence of EPVTKAEML was connected successfully to terminus of human HSP70. Enzyme digestion analysis showed the fusion gene was cloned into pET28a(+). SDSPAGE showed that a Mr000 fusion protein was expressed. CONCLUSION: The fusion gene of EPVTKAEMLHSP70 has been successfully constructed and expressed in BL21(DE3). K
4、eywordshepatoma/immunology; antigen; neoplasm/genetics; epitope; heatshock protein0/genetics; gene expression 原发性肝癌是严重危害我国人民身体健康的恶性疾病之一。近几十年来, 尽管诊疗手段有了很大的进步, 但肝癌的预后并没有得到显著改善。生物治疗是肝癌治疗的重要手段之一, 尤其可能在复发转移的控制中发挥重要作用。我们应用弱酸洗脱质谱法首次从肝癌细胞系中成功分离了MAGE1编码的由HLAB7提呈的肝癌抗原肽EPVTKAEML, 将其负载DC细胞, 在体外及裸鼠体内均可诱导抗肝癌特异性免疫反应1,。为加强EPVTKAEML的免疫原性, 选择具有诱导抗肿瘤免疫作用的HSP70为载体, 制备了EPVTKAEML与HSP70的融合蛋白, 为进一步观察融合蛋白能否诱导产生肝癌抗原肽特异性CTL, 寻求更有效的抗肝癌抗原肽疫苗奠定基础。 1 材料和方法 材料 菌种 BL21(DE3)由本室保存。原核表达载体pET28a(+)、 含HSP70基因全长片段的质粒 (+)/HSP70 (本校病理学
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