医学ppt课件大全医学实验室评审员持续培训
31页1、基因扩增检验专业现场评审方法和技巧,医学实验室评审员持续培训/ 评审组长同级转换培训班 上海,现场评审的基本思路,基因扩增检验实验室均经过卫生部临床检验中心的技术验收,验收标准又基本参照了ISO15189认可准则的要求,所以,在评审准备要实验室提供验收合格证书 日程安排上不能因通过了技术验收而忽视了PCR实验室的认可 重点关注申请的项目是否都有批文、各项记录是否完善等内容,常见不符合项举例及分析,HBV-DNA可报告范围为103108,HCV-RNA可报告范围为103107,标准曲线和室内质控的浓度设定都在104以上,建议观察103低浓度值。 有一位从事临床基因扩增检验工作人员未获得培训合格证书,分区,现场评审的重要环节,检验前程序(PCR技术验收表6标本管理)验收表比较简单,应注意RNA、分泌物等标本的采集、运输和保存 检验程序(见后) 检验后程序(注意TAT是否满足质量目标的要求;报告单所必须包含的内容) 座谈会(要了解临床对定量HBV-DNA;性病检测),DNA、RNA的保存,DNA标本无菌条件2-8保存不超过3天,超过3天- 20 。标本长期保存应在-70。避免多次反复冻融。D
2、NA在TE缓冲液中(10mmol/L Tris-Hcl,1mmol/L EDTA,PH 8.0),4储存6个月以上,其中EDTA还可抑制微生物生长。 RNA容易降解,操作和储存中要防止RNA酶的污染。所用器皿高压灭菌后用,重蒸水配制或用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的蒸馏水溶解RNA,RNA溶液中加入RNA酶抑制剂(RNasin), 终浓度为2U/10l,置-20保存备用。冰块上操作为宜。,其他标本,棉拭子生理盐水充分振荡洗涤、静置510min、取上清、离心、沉淀物提DNA。如不立即提取,存70 脓液沉淀标本的保存同样为70 体液沉淀标本的保存同上,检测系统,校准(加样器、温湿度计、扩增仪)查看文件与实际校准的情况频度:首次(新安装);后续(主要部件维修,强制周期如 每年,不定期)PCR仪:温度准确度及升降速率;荧光本底;激发及吸收波长的准确度、杂闪光、重复性、线性,检测系统,比对没有开展室间质评的项目;比对的结果 性能验证新启用的设备 维护保养 保养程序、操作手册严格按照仪器使用手册编写,包括日、周、月、季、半年、年 标识(时间、名称) 记录,现场评审的关注点,检测系统 室内质控 室
3、间质评 溯源及测量不确定度 现场试验,人员能力 检验前程序观察 检验报告 生物安全 座谈会,室内质控,采用一系列统计学的方法连续地评价检测工作的可靠程度,判断检验报告是否可以发出的过程 目的是控制本实验室测定工作的精密度,监测其准确度的改变,提高常规检验工作的批间、批内标本检测结果的一致性 室内质控规则的制定是否合理(质控图、质控水平、质控频率)每次现场验收问题最多的地方,室内质控,质控目的:假阴性、假阳性,准确性、精密度 质控点:样本质量、模板提取、扩增效率 质控物安排:空白、阴对、弱阳对、标准品 控制范围:空白、阴对-阴性弱阳对-阳性(上下一次方)标准品-r值( - 0.998)斜率(-3.1- -3.5)截距(40左右;达安 30)点间CT值 (3.3左右),如何确定阈值,基线的作用(Baseline cycles )消除检测中背景荧光信号的影响,确定阈值基线的范围:仪器一般默认的范围(应根据试剂合要求)PE-5700 、PE-7000 3-15iCycle 2-10 LightCycle 3-12 基线需根据实验结果进行适当调整:延长基线以包括最高浓度样本扩增曲线起跳前尽可能多
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