微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告
10页1、微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告微量凯氏定氮法测定蛋白质含量实验报告一、实验目的一、实验目的1.学习微量凯氏定氮法的原理2.掌握微量凯氏定氮法的操作技术(未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等)二、实验原理二、实验原理凯氏定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氨基酸等)的含氮量。当天然含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢被氧化成二氧化碳和水,而氮则变成氨并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程称为“消化”。此过程进行的相对较为缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高溶液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化过程:424423)(2SONHSOHNH322242NHOHSOCOSOH含氮有机物蒸馏:在消化完全的样品溶液中加入浓氢氧化钠使呈碱性,加热蒸馏,即可释放出氨气。反应方程式如下:OHNHSONOHNSONH4424242aa2)(吸收与滴定:蒸馏所放出的氨,可用硼酸溶液进行吸收,待吸收完全后,再用盐酸标准溶液滴定,直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止(即滴定至蓝紫色),最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待
2、测物中的氮量。324333BOHNHBOHNH334324BOHCLNHHCLBOHNH三、实验试剂、材料和器材三、实验试剂、材料和器材实验材料:食用面粉。实验试剂:浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.01M HCL。实验器材:凯氏烧瓶、电炉、凯氏定氮蒸馏装置、锥形瓶、100ml 容量瓶、酸式滴定管。四、操作步骤四、操作步骤1.1.消化消化(1)准确称取 1 克食用面粉,用称量纸卷好小心送入至 50 毫升的凯氏烧瓶底部,切勿沾于瓶口或瓶颈上;(2)向另一烧瓶加入 1ml 水作空白对照;在每个烧瓶内加入硫酸钾硫酸铜混合物(克氏催化剂)少许,浓硫酸 10ml,小瓷片两粒,摇匀;(3)将烧瓶约 60 度角固定在铁架上,每个瓶口放一小漏斗,在通风厨内的电炉上消化;(4)在消化开始时,应控制火力,不要使液体冲到瓶颈;(5)待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出 SO2 白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明绿色为止;(6)消化完毕,待烧瓶内容物冷却后,加蒸馏水 10ml(注意慢加,边加边摇);(7)冷却后将瓶中内容物转入 100ml 的容量瓶中,并用蒸馏水洗烧瓶数
3、次,溶液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度摇匀,做上记号备用。2.2.蒸馏蒸馏(1)蒸馏器洗净后,开放水龙头 P3,使水进入 A 室,水放至A 室球部 2/3 处即可。(2)取 3 个 50ml 的锥形瓶,分别加入 10ml 硼酸(内加有混合指示剂)。用表面皿复盖备用。(3)加样 用移液管吸取 2ml 消化液,小心地由漏斗 D 倾入 B 室; 取一个盛有硼酸的锥形瓶,置于 M 管下,使管口恰好接触硼酸溶液,用量筒从漏斗 D 加入 30%氢氧化钠 5ml,随即将 P4 夹紧,并往漏斗加入少量蒸馏水封闭。(4)蒸馏 用酒精灯加热,维持火力恒定,沸腾不可高于 Y 管口以免 A 室溶液从 Y 管倒吸,待第一滴蒸馏液从冷凝柱 F 顶端滴下时起,继续蒸馏 5 分钟; 然后将锥形瓶放低,使导管离开液面再蒸 2 分钟,最后用蒸馏水洗导管外壁,蒸馏完毕,取下锥形瓶准备滴定。(5)空白蒸馏 用移液管分别吸取 2ml 蒸馏水按上述操作步骤进行蒸馏。仪器的洗涤:仪器的洗涤:3.3.滴定滴定(1)蒸馏完毕,用微量酸式滴定管,以 0.01mol/L 盐酸标准溶液进行滴定锥瓶内溶液,溶液由蓝绿色变为淡紫色或灰色,即为终
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