【生物课件】第十章 传染与免疫 第四节 免疫学方法及其应用
61页1、微生物学浙江工业大学生物技术系裘娟萍 钟卫鸿 邱乐泉 汪琨第四节 免疫学方法及其 应用传统的免疫学方法仅局限于用体液免疫产生的抗体与各种抗原在体外进行反应,所用抗体都取自血清,因此称作血清学反应(serologicalreaction)。体液免疫细胞免疫现代免疫学方法免疫诊断学(immunodiagnostics)免疫学检测,等分支技术学科一、血清学反应1. 定义在体外进行的抗原抗体反应称为血清学反应。已知抗体已知抗原未知抗体未知抗原检测检测2. 血清学反应的特点(1)特异性抗原决定簇和抗体分子V区间的各种分子引力是它们间特异性的物质基础。A抗原结合 A抗体B抗原B抗体结合A抗原刺激机体A抗体B抗原B抗体(2)可逆性抗原抗体间的结合仅是一种物理结合,故在一定条件下是可逆的。抗原与抗体结合后,其原有的毒性等性状均为改变。抗原物质表面的抗原决定簇数目一般较多,多价;抗体一般仅以Ig单体形式存在,双价。(3)定比性抗原与抗体结合,只有两者分子比例适当才能形成肉眼可见的反应。抗原与抗体的反应一般有两个明显的阶段。第一阶阶段抗原与抗体结合形成复合物 (一般仅仅数秒)时间短不可见第二阶阶段复合物与
2、环境因素作用 (从数分钟钟至数小时时或数天 )时间长可见(4)阶段性最佳条件一般为:pH=68,3745,适当振荡,以及用生理盐水作电解质等。(5)条件依赖性二、抗原、抗体间的主要反应(一)凝集反应(agglutination)颗粒性抗原(完整的细菌细胞或红细胞等)与相应的抗体在合适的条件下反应并出现肉眼可见的凝集团的现象,称为凝集反应(agglutination,agg,aggl)或直接凝集反应(direct agglutination)。在作凝集反应时,由于抗原体积巨大,抗原结合价相对较少,所以为使抗原和抗体间有一合适比例,一般都应稀释抗体(即抗血清)。抗原凝集原(agglutinogen)抗体凝集素(agglutinin)(1)直接法玻片法试管法例如,诊断伤寒或副伤寒症的试管定量试验肥达氏试验(Widals test),菌种鉴定或定型中的玻片凝集试验等。(2)间接法典型的间接凝集试验(indirect agglutination test)又称被动凝集反应(passive agglutination)。其基本原理是将可溶性抗原吸附到适当载体上,使其成为人工的“颗粒性抗原”,从而也
3、会产生凝集反应而可用肉眼检出。可用作载体的材料有人和动物的红细胞,活性碳或白陶土颗粒,以及聚苯乙烯乳胶微球等。可测定的对象:抗细菌抗体、病毒抗体、Leptospira (钩端螺旋体属)抗体以及Treponema pallidum(梅毒螺旋体)抗体等。把抗体吸附于红细胞等颗粒上,以检出相应的抗原,称为反相间接凝集试验。例如,用于血液中HBsAg(乙型肝炎表面抗原)、甲胎蛋白和钩端螺旋体的诊断等。血型的鉴定血型的鉴定A标标血清(A-Ab) B标标血清(B-Ab)被测测者血细细胞被测测者血细细胞被测测者血型O型A型B型AB型血型A抗原B抗原O型无无A型有无B型无有AB型有有在体内凝集反应能增强吞噬作用;在体外凝集反应可用于血型检查和菌种鉴定;(二)沉淀反应(precipitation)可溶性抗原与其相应的抗体在合适条件下反应,并出现肉眼可见的沉淀物的现象,称为沉淀反应(precipitation,pptn)。沉淀原(precipitonogen)沉淀素(precipitin)抗原抗体常见的可溶性抗原蛋白质质多糖类类脂溶液血清细细菌抽提液组织组织 浸出液三、免疫标记技术免疫标记技术(immun
4、olabelling technique)免疫定位分析(immunolocalization)免疫亲和层析(immunoaffinity chromatography)免疫生物传感器技术(immunobiosensor technique)免疫标记技术(immunolabelling technique)是指将抗原或抗体用小分子的标记剂如荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质等加以标记,借以提高其灵敏度和便于检出的一类新技术。优 点:特异性强,灵敏度高,应用范围广,反应速度快,容易观察,能定性、定量甚至定位。免疫酶技术又称酶免疫测定法(enzyme immunoassay,EIA)。一种利用酶作标记的抗体或抗抗体以进行抗原、抗体反应的高灵敏度的免疫标记技术。(二)免疫酶技术(immunoenzymatic technique )此法由Engvall等于1971年提出。其原理是用酶来标记抗体或抗抗体,带上酶标记后的抗体仍然能与抗原反应,酶结合抗体后仍具其催化活性。由于酶的催化作用,可使原来无色的底物通过水解、氧化或还原反应而显示颜色。免疫酶技术的优点:由于是产色反应,故可用普通光学显微镜
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