高通量筛选技术课件
42页1、高通量筛选筛选 技术术High throughput screening 王 陶2012年2月高通量筛选 最初是伴随组合化学而产生的一种药物筛选 方式。1990年末,组合化学的出现改变了人类获 取新化合物的方式,人们可以通过较 少的步骤、在短时间 内同时合成大量化合物,在这样的背景下高通量筛选 的技术应 运而生。高通量筛选 技术可以在短时间 内对大量候选化合物完成筛选 ,经过 近十年的发展,已经成为比较成熟的技术,不仅仅应 用于对组组合化学库库的化合物筛选 ,还更多地应用于对现现有化合物库库的筛选 。目前世界各大药物生产商都建立有自己的化合物库和高通量筛选机构,对有潜力形成药物的化合物进行篦梳式的筛选 。我国药物高通量筛选起步较晚,且不规范,仅有十多年的研究历史。1996年中国医学科学院引进国内第一台Bionek2000型实验自动化工作站;1998年又引进全国第一台Topcount微量闪烁计数器,使放射配基实验、放射免疫实验等技术微量化、自动化。上海药物研究所、北京军事医学科学院分别成立了药物筛选专门机构,开始从事大规模筛选工作。西安交通大学药学院贺浪冲教授首创的细胞膜色谱(CMC)为
2、化合物的体外高通量筛选提供了高选择性、高特异性、高效率的筛选手段。CMC已成功用于钙离子拮抗剂受体配体结合反应的研究,目前正在进行心血管化学合成药物的高通量筛选和中药有效部位及有效成分的寻找。今年将建立CMC自动化筛选体系,促进我国药物高通量筛选技术的全面发展 。概念l高通量筛选(High throughput screening,HTS)技 术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础 ,以微板形式作为实验 工具载体,以自动化操作 系统执行试验过 程,以灵敏快速的检测仪 器采集 实验结 果数据,以计算机对实验 数据进行分析处 理,同一时间对 数以千万样品检测,并以相应的 数据库支持整体运转的技术体系。l高通量细胞筛选技术(high-throughput cell-based screening technology) 是以高通量方式研究基因功 能最有效的方法之一。通常,基因功能的初步筛选 在96 孔或384 孔板上进行,通过基因转染将候选基 因导入细胞,或直接将基因表达产物加入细胞培养 液中。 是20世纪80年代后期发展起来的一种筛选新技术。它集计 算机控制、自动化操作、高灵敏度检测、
3、数据结果自动采集和 处理于一体,实现了筛选的快速、微量、灵敏和大规律,日筛 选量达到数万甚至数十万样品次,是筛选技术和方法的一大进 步。l筛选测 定方法基于要研究的生物学或医学问题,例 如,要研究抗血管生成活性,选用内皮细胞进行细胞 生长、分化、迁移和粘附等分析测定;研究免疫调 节活性,可选择淋巴细胞或造血细胞进行细胞生长 和分化的分析测定;研究神经营养因子活性,可选用 神经细胞进行细胞存活、突起生长测定。除上述 与细胞表型或形态学相关的检测指标外,细胞信号 转导通路、糖代谢、能量产生和代谢产物分析 (metabolic control analysis) 等代谢通路也是基因 功能重要的研究内容。 l结合抗体芯片技术、多路测定技术 (multiplexing) 等新的检测 方法,高通量细胞 筛选 的应用更为广泛。另外,随着荧光成像 读板仪(fluorescence image plate reader ,FLIPR) 、定量PCR、高通量荧光激活细胞 分类器(HT-FACS) 等检测 方法和技术的不 断发展和应用,灵敏度和重现性这两个高通 量细胞筛选 的关键问题 也逐步得以解决。 一、
4、高通量筛选常用仪器设备Whatman过滤型做孔板是种多孔形状物体,便于快速和 批量处理样品。板上刻有号码适合于各种微孔板配用仪 器和白动控制装置。Boekel 微孔板振荡器的特点 独立设定温度,振荡速度和混合时间; 混匀器可以编程设定运行一定时间或者瞬时混合3秒; 内置的盖可以减少污染,样品挥发或者噪音的危险。多通道移液器连续 移液器一次性吸取 大量液体, 然后每次按 动按钮, 仅仅释 放 小量等体积 的液体。大 量液体进行 等体积分装215全自动移液工作站 1.大容量,可自动处 理12个96孔反应板或480个试管的样品。 2.特别适合于HPLC或LC/MS的样品处理。 3.使用709软件,有易用的图示管架编辑 器。 4.无论开口试管或密封试管都有很高精确度。5.Micro215进样 量可低至0.5ul。 6.多通道215自动样 品处理系统可同时处 理8个样品。 多功能酶标仪 (多功能微孔板检测仪 )微孔板检测设备 之一,集成4大功能模 块,可进行放射性/非放射性检测。流式细胞仪C6 流式细胞仪系统是一种全功能、双激光、六探测 器的流式细胞仪分析系统, C6流式细胞仪系统的探 测器不但
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