1、HIV 测定（ELISA 法）标准操作规程 1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的 HIV（1+2）型抗体的测定，用于 HIV 感染的辅助诊断，抗 HIV 药物治疗的效果的监测。 2、原理 采用夹心 ELISA 方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒 HIV（1+2）型抗体，预包 被高纯度基因重组 HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV 抗体反应，加入 HRP 标记 HIV（1+2）型抗体抗原结合，形成抗原抗体酶标抗原复合物，然后加入 TMB 底物产 生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD 值） ，根据 OD 值判断 HIV 抗体的存在与否。 3、性能参数 灵敏度高（0.5ng/ml） 4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆。 （2）标本采集：见标本采集手册 （3）标本储存和运输：室温放置不超过 8 小时，2-8不超过 72 小时，-20可长期保存， 应避免反复冻融 （4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。 本文来自检验地带网 5、容器和添加剂类型 6、试剂 （1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型抗
2、体诊断试剂盒。 （2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司 （3）包装规格： 96T/Kit （4）试剂盒组成：、HIV 酶标板；、HIV 酶标试剂；、HIV（1+2）型阳性及阴性 对照血清；、显色剂 A 液和 B 液；、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、 说明书等。7、仪器设备： 酶标仪：ZS 板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。 洗板机：DNM-9620 型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。 8、校准程序 9、操作步骤 、配液：将 50ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 25 倍稀释至 1000ml 备用。 、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照 2 孔、阳性对照 3 孔，空白对照 2 孔。 、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照 100l，用封板膜封板后置 37 温育 60min。 、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择 5 次程序，洗板后在干净纱布上拍干。 、加酶：每孔加酶结合物 100l（空白对照孔除外） ，充分混匀，用封板膜封板后置37温育
3、30min。 、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择 5 次程序，洗板后在干净纱布上拍干。 、显色：每孔加入底物缓冲液 50l，TMB 50l，轻轻振荡混匀，封板后置 37避光显 色 10min。 、测定：每孔加终止液 50l，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为 450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长 630 nm） ，空白调零，读取各孔 OD 值。 、判断结果：计算临界值（cut-off）值。 临界值=阳性对照值10%。 （若阳性对照 OD 值2.5 按 2.5 计算） 正常情况下，阴性对照孔的 OD 值0.08。样品 OD 值临界值者为 HIV 抗体阴性。若 1 孔阴性对照的 OD 值0.08 应舍弃，若有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的 OD 值0.08，应重 复实验。 本文来自检验地带网 正常情况下，阳性对照孔的 OD 值0.80。样品 OD 值临界值者为 HIV 抗体阳性。若 1 孔阳性对照的 OD 值0.8 应舍弃，若有 2 孔或 2 孔以上阳性对照的 OD 值0.8，应重复 实验。 注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照全国 HIV 检测管理
4、规范送 HIV 确证实验室进行确证试验。 10、质量控制： 每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔 OD 值 采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试 剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。 11、干扰和交叉反应 12、生物参考区间 正常人阴性。 13、患者检验结果的可报告区间 阳性表示 HIV 病毒感染。 14、临床意义 用于 HIV 感染的辅助诊断，抗 HIV 药物治疗的效果的监测。 15、其它： 必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格“防伪标签的试剂。HIV 测定（胶体金法）标准操作规程 2010-12-28 来源:检验地带网 浏览:703 次 转发至： 【字号：大 中 小】 核心提示： 1、检验目的 用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV- 2 抗体，用于帮助检测受感染个体的 HIV-1 和 HIV-2 抗体。本品检测阳性者，需进一步确 证。 2、原理 利用双抗原夹心法检测 HIV 抗体。标本加入反应板，若标本
5、中含有 HIV 抗 体时，先与金 1、检验目的 用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV-2 抗体，用于 帮助检测受感染个体的 HIV-1 和 HIV-2 抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。 2、原理 利用双抗原夹心法检测 HIV 抗体。标本加入反应板，若标本中含有 HIV 抗体时，先与金 标抗原反应，形成抗体-金标抗体复合物，在虹吸作用下向前移动，遇到包被抗原形成抗原 -抗体-金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。包被膜上同时带有一条质控包被线作为对照， 所以当出现一条红色质控线和一条（或两条）红色反应线时判断为阳性。当待测标本中无 HIV 抗体时，只出现一条红色质控线则判断为阴性。作为质控，不管结果为阳性或阴性， 都会出现一条红色质控线。如无红色质控线（或只有反应线）出现，则实验无效。本方法 适用于血清标本检测，用于医院、海关及无偿献血员现场快速体检等。 3、性能参数 4、标本要求 （1）标本类型：血清。 （2）标本采集：见标本采集手册。（3）标本储存和运输：新鲜血清 28贮存时间不超过 72 小时。 （4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血
6、标本不能作测定。 5、容器和添加剂类型 6、试剂 （1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1+2）抗体诊断试剂（胶体金法） 。 （2）试剂生产厂家：天津中新科炬生物制药有限公司。 （3）包装规格：1 个测试/包装袋；25 个测试/盒。 （4）试剂盒组成：单人份包装测试板，每盒 25 人份。说明书一份。 7、仪器设备（请根据各实验室情况自行添加） 8、校准程序 9、操作步骤 HIV-1+2 抗体诊断试剂盒操作流程 （1） 、撕开包装有 HIV-1+2 抗体检测板的袋，取出检测板水平放置于实验台上。 （2） 、用塑料吸管吸 2-3 滴血清标本（70-100 微升）加入标本孔中。 （3） 、15-30 分钟内观察结果。 10、结果判断 （1） 、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反应。 （2） 、阴性：仅出现质控一条红线，则实验结果为阴性。 （3） 、无效：如无红线（或只有反应线）出现，表明实验无效，须重新检测。 11、质量控制： 阴性对照显示为阴性；阳性对照显示为阳性。 12、干扰和交叉反应 其他体液或混合样品可干扰反应，不可用 EDTA 抗凝的全血血浆。 13、生物参考区间 正常人为阴性 14、患者检验结果的可报告区间 阴性；阳性。 15、临床意义： 监测血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV-2 抗体，用于帮助检测受感染个体的 HIV-1 和 HIV-2 抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。 16、其它： 必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格“防伪标签的试剂。 ：
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