epec粘附素intiminc280抗血清的制备及其中和能力测定
13页1、EPEC 粘附素 IntiminC280 抗血清的制备及其中和能力测定 康迁 黄荣 冯亚岚 皮光环 杨健 川北医学院附属医院儿科 川北医学院基础医学院病原生物学与免疫学实验教学中心 摘 要: 目的 制备 EPEC 粘附素 IntiminC280 抗血清, 检测其中和 EPEC 对 Hep-2 细胞粘附作用。方法 用基因克隆技术构建 IntiminC280 表达载体 pET32 () -intiminC280, 转化表达宿主菌 BL21, 用 IPTG 诱导 His-IntiminC280 融合蛋白的表达, SDS-PAGE 分析其表达形式;用 NI 柱亲和层析法纯化融合蛋白, 并辅以佐剂免疫家兔, 4 次免疫后采血, 分离血清, 对流免疫电泳法检测抗血清效价;以该抗血清作为一抗, 采用 Western blot 检测 EPEC 粘附素 Intimin 的表达;用不同稀释度的抗血清中和 EPEC, 显微镜下观察细菌被中和后对 Hep-2 细胞的粘附情况。结果 成功构建 BL21/pET32 () -intiminC280 原核表达系统, 表达蛋白的分子质量单位为 50ku, 与预期相符。
2、用纯化的 His-IntiminC280 免疫家兔获得高效价抗血清, 16 倍稀释后仍能有效抑制 EPEC 对 Hep-2 细胞的粘附。结论 IntiminC280 抗血清具有抑制是 EPEC 粘附 Hep-2 细胞作用, 可作为 EPEC疫苗研发的备选抗原。关键词: 肠致病性大肠埃希菌; 紧密素; 抗血清; 粘附; 作者简介:杨健, E-mail:作者简介:康迁 (1989-) , 女, 四川达州人, 在读研究生, 主要从事肠道病原体的研究。E-mail:收稿日期:2017-06-17基金:四川省教育厅项目 (No.15ZA0205) Preparation of antiserum against IntiminC280 (an EPEC antigen responsible for adhesion) and examination of its neutralization abilityKANG Qian HUANG Rong FENG Ya-lan PI Guang-huan YANG Jian Pediatrics, North Sichuan Medical Coll
3、ege Hospital; Experimental Teaching Center for Pathogens and Immunology, School of Basic Medical Sciences, North Sichuan Medical College; Abstract: Objectives To prepare antiserum against IntiminC280 (an EPEC antigen responsible for its adhesion) and to observe whether the antiserum could affect the adhesion of EPEC to Hep-2 cells. Methods The IntiminC280 expression plasmid pET32 () -intiminC280 was constructed using gene cloning and transformed into the host strain BL21.Expression of the His-In
4、timinC280 fusion protein was induced with IPTG and that expression was analyzed with SDSPAGE.The fusion protein was purified with Ni column affinity chromatography and the purified protein was used to immunize rabbits with adjuvants.After 4 immunizations, serum was collected and the antiserum titer was measured using a convective immunoassay.The antiserum was used to recognize the expression of EPEC Intimin in Western blotting.The adhesion of EPEC to Hep-2 cells was observed after EPEC was neutr
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