【临床微生物实验】_嗜血杆菌军团菌属
80页1、1,嗜血杆菌属Haemophilus,广州医科大学临床微生物检验室学习,2,3,流感嗜血杆菌菌名来自1892年流感世界大流行, 由费佛(Dr. Pfeiffer) 博士发现。 直至1933年将流感病毒分离成功才确认流感的真正病原体。 但流感嗜血杆菌这一错名却仍沿用至今。,4,嗜血杆菌属(Haemophilus),与临床有关的9个种: 流感嗜血杆菌(H.influenzae) 副流感嗜血杆菌(H .parainfluenzae) 溶血嗜血杆菌(H .haemolyticus) 副溶血嗜血杆菌(H .parahemolyticus) 杜克嗜血杆菌(H .ducreyi) 埃及嗜血杆菌(H .aegyptius) 嗜沫嗜血杆菌(H .aphrophilus) 副嗜沫嗜血杆菌(H .paraphrophilus) 迟缓嗜血杆菌(H .segnis) 代表菌:流感嗜血杆菌(H .influenzae),除这两菌外均不溶血,5,临床意义,致病因素: 荚膜:主要毒力因子 流感嗜血杆菌根据荚膜的有无分成: 有荚膜菌株(血清分型基础,b型毒力最强) 无荚膜菌株(较少侵略性) 菌毛:黏附作用 内毒素:发热
2、等 该菌引起的感染常发生在病毒等引起的呼吸道感染之后,几种主要嗜血杆菌常栖部位及所致疾病,7,形态染色结构 1.G-小杆菌,球杆状 2.具有多形性(球 杆、长杆或丝状) 3.无芽胞,无鞭毛, 不能运动 4.有荚膜菌株毒力较强,流感嗜血杆菌(H.influenzae),8,流感嗜血杆菌革兰染色,铜绿假单胞菌革兰染色,9,10,根据荚膜多糖抗原不同分为a、b、c、d、e、f 6个血清型,b型致病性最强(Hib疫苗预防) 能分解葡萄糖、氧化酶(-)、触酶(+) 根据对吲哚、脲酶、鸟氨酸脱羧酶试验的生化反应不同分为8个生物型。,抗原性和生化反应,11,12,培养特性,分离培养: 需氧或兼性厌氧,需5-10%CO2 最适T 35-37 (杜克33) ,最适pH7.67.8 营养要求高 生长需要X和V因子(均存在于红细胞中)。 最适培养基为巧克力平板 菌落: 培养1824h,特殊的“鼠窝味”、不溶血 无荚膜菌株:灰白色、光滑、半透明小菌落 有荚膜菌株:灰白色、粘液样、半透明较大菌落 不同种型嗜血杆菌对X、V因子需求不相同,13,培养基:巧克力平板 血细胞中含有X、V因子,V因子处于抑制状态,加热8
3、0-90 5-15min破坏细胞膜上抑制物,可使V因子释放 巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、杆菌肽)可提高检出率,培养特性,14,流感嗜血杆菌,巧克力平板:灰白色、半透明菌落,15,X因子 V因子 溶血 流感嗜血杆菌 + + - 副流感嗜血杆菌 - + - 嗜沫嗜血杆菌 - - - 副嗜沫嗜血杆菌 - + - 溶血嗜血杆菌 + + + 副溶血嗜血杆菌 - + + 杜克雷嗜血杆菌 + - - 埃及嗜血杆菌 + + -,几种嗜血杆菌对生长因子需求,16,流感嗜血杆菌巧克力平板培养24h,17,培养48h后菌落,18,流感嗜血杆菌“卫星现象”(血平板上出现),MH平板上金葡菌周围未见生长,血平板上金葡萄周围生长(左),金黄色葡萄球菌可产生V因子,血细胞可提供X因子,19,抵抗力弱 对热敏感:5630min可杀死 对干燥、消毒剂等敏感 自溶酶 室温保存,4-5天转种一次,抵抗力,20,菌落特征: 巧克力平板上灰白色半透明菌落 卫星现象: 当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同培养时,由于金葡菌能合成释放V因子,并扩散到培养基中 ,可促进流感嗜血杆菌生长,在金葡菌周围生长的菌落较大,越远
4、越小直至没有。 因子生长试验: MH平板上贴上X、V、XV因子纸片,在所需因子纸片周围生长 生化反应 糖发酵试验,鉴 定,21,卫星试验 “卫星试验”是检测对V因子的需求,培养基加血与否是确定细菌对X因子的需求 流感仅在血平板上卫星试验(+),在MH上(-) 副流感仅需V因子,在血平板和MH平板上均可出现卫星现象。,22,卫星现象:金葡菌周围出现生长,流感嗜血杆菌,金葡菌,卫星现象(satellite phenomenon),23,流感嗜血杆菌,金葡菌,卫星现象,24,卫星现象,25,副流感嗜血杆菌V因子利用试验(MH平板),26,流感嗜血杆菌: 氧化酶(-) 触酶试验(+) 葡萄糖(+)、蔗糖、乳糖和甘露醇阴性、木糖多(+) 硝酸盐还原(+) 有荚膜菌吲哚(+) 无荚膜菌吲哚(-) 不溶血,生化反应,注:D为不同结果,嗜血杆菌属中种的特征,28,微生物学检验 标本采集:避免干燥 及时送检 分离培养:巧克力平板生长 血平板 不生长 检验程序,微生物学检验,血液 脑脊液 鼻咽拭子 痰 脓汁 增菌培养 分离培养 涂片镜检(G-小杆菌多形性) (巧克力平板 ) 抗原检测 35 5-10%CO
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