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【临床微生物实验】_沙门菌属和耶尔菌属(2013检本)

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  • 卖家[上传人]:NU****AN
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    • 1、第五节 沙门菌属 Salmonella,掌握内容,沙门菌属及耶尔森菌属 1、生物学特性(形态染色、培养及生化反应) 2、在选择性培养基上菌落形态 3、检验程序 4、所致疾病,1880年,Eberth首先发现伤寒杆菌。 1885年,美国病理学家Salmon首次分离到猪霍乱沙门菌。 2007年在宾夕凡尼亚州生牛奶引发伤寒爆发, 29人腹泻的症状。 美国鸡蛋受沙门菌感染事件 2010年8月17日加州多个地区暴发沙门菌疫情,266例患病报告。鸡蛋召回数量起初为2.28亿枚,23日升至5.5亿枚。 美国人生吃西红柿“中毒”事件 2008年6月美国9个州,数百人因生食了新鲜西红柿而出现发烧、腹泻、腹痛等症状,有几十人因病情严重需住院。,沙门菌的发现和食物中毒,typhoid fever is still a big health-problem in developing countries. The WHO estimates that there are worldwide about 16 million of clinical cases annually, of which about

      2、600,000 result in death. In comparison, about 400 cases occur each year in the U.S., and 70% of these cases are acquired while traveling internationally. The most commonly reported serotypes, in history and present: S. typhi、 S. enteritidis and S. typhimurium,肠沙门菌(S.enterica) 邦戈沙门菌(S.bongori),沙门菌属分类,亚种 肠沙门菌肠亚种 亚种 肠沙门菌萨拉姆亚种 亚种a 肠沙门菌亚利桑那亚种 亚种b 肠沙门菌diarizonae亚种 亚种 肠沙门菌毫顿亚种 亚种 肠沙门菌indica亚种,沙 门 菌 属,沙门菌属目前至少有2500种以上血清型。 如:伤寒沙门菌的全名是“肠沙门菌肠亚种伤寒血清型”(Salmonella enterica subspecies enterica serotype Typhi),

      3、可缩写为伤寒血清型沙门菌(Salmonella Typhi) 沙门菌99临床分离株是亚种中的菌株。,沙门菌属分类,伤寒沙门菌 副伤寒沙门菌 (甲、乙、丙),人,肠热症,鼠伤寒沙门菌 肠炎沙门菌 猪霍乱沙门菌,儿童伤寒,人、动物,急性胃肠炎,鸡伤寒沙门菌,动物,沙门菌属临床意义,亚种1的菌种根据其对宿主的致病性, 可分为三类,侵袭力: Vi抗原、菌毛粘附 内毒素:可引起体温,WBC血压 肠毒素:(鼠伤寒沙门菌),致病物质,所致疾病,肠热症:伤寒、副伤寒 胃肠炎:食物中毒 菌血症 携带者,病人 带菌者,粪-口,1、肠热症:,肠壁固有层 淋巴结,淋巴液,肠系膜 淋巴结,胸导管,血,第一次 菌血症,胆囊、骨髓、肝、脾、肾,第二次 菌血症,发热、不适、 全身疼痛,持续高热、 相对缓脉、 肝脾肿大、 外周血WBC下降,2W后发生肠局部 坏死溃疡致 肠穿孔,随尿排出,随胆汁进入肠道随粪便排出,2、胃肠炎(食物中毒):最常见,鼠伤寒沙门菌 猪霍乱沙门菌 肠炎沙门菌,大于108,食物中毒(发热、恶心、呕吐、 腹痛、水样泻),3、菌血症或败血症:,鼠伤寒沙门菌 猪霍乱沙门菌 肠炎沙门菌,血,败血症(高热、

      4、寒战、贫血) 或菌血症,脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎等,4、无症状带菌者,约1-3%伤寒或副伤寒患者,症状消失1年后,粪便仍可排菌,这些菌主要留在胆囊中,有传染性。,“伤寒玛丽”,沙门菌属的生物学特性,一、形态染色 二、抗原结构 三、培养和生化特性 四、抵抗力,形态染色,革兰阴性杆菌,直而细长,多有周鞭毛、无芽孢、无荚膜,沙门菌电镜图,鞭毛抗原(H),菌体抗原(O),表面抗原(K、Vi抗原),抗原构造,1. O抗原: 多糖-类脂-蛋白质复合物,耐热 刺激机体产生IgM类抗体(出现早、消失快) (1)O抗原的表示方法 共有58种,已排到67。 O1 、O2 、O3、 O4 O67 (2)沙门菌的分群及表示方法 有共同抗原成分的血清型归为一个群。 A、B、C、D、E、F Z、 O51 O63、 O65 O67 例如:O2(A)群; O6,7(C1)群 95以上致病菌在A-F群,抗原成份,2. H抗原: 蛋白质,不耐热 刺激机体产生IgG类抗体(出现迟、消失慢) 沙门菌H抗原有两种: I相:特异相, 小写字母表示a、b、cz z1z55 II相:非特异相, 阿拉伯数字表示1、2、3,也有用小写字母

      5、a、n、x等表示,抗原成份,3.表面抗原: 有三种:Vi抗原、M抗原、5抗原 是不耐热的多糖荚膜抗原,抗原性弱 Vi抗原位于菌体的最表层,包围了O抗原,可阻碍O抗原的血清学凝集试验。 破坏Vi抗原:100 10min 含有Vi 抗原的沙门菌: 伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌,抗原成份,S-R变异: 光滑型-粗糙型 H-O变异: 有鞭毛-无鞭毛 位相变异:双相型-单相型 V-W变异: 失去Vi抗原,变异性,对热抵抗力不强: 60 1h 或 6515-20min 水:23周 粪便:12个月 耐胆盐、煌绿,抵抗力,培养特性,1、兼性厌氧,最适生长温度3537,最适 pH6.87.8,营养要求不高。 2、肠道选择性培养基(MAC、EMB、SS、XLD): 小至中等、半透明、乳糖不发酵菌落, 产H2S菌株在SS、XLD上为黑色菌落。 3、普通培养基:圆形、光滑、湿润、不透明、边缘 整齐的中等菌落。,选择性培养基,SS平板: 含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿、 硫代硫酸钠等 Mac平板: 含乳糖、中性红指示剂、胆盐等 中国蓝平板:含乳糖、中国蓝和玫瑰红酸指示剂 EMB平板: 含乳糖、伊

      6、红和美蓝指示剂 XLD平板: 含木糖、乳糖、蔗糖、赖氨酸、 去氧胆酸钠、酚红指示剂等,伤寒沙门菌菌落特征(血平板),伤寒沙门菌菌落特征(SS平板),不产H2S的沙门菌落特征:无色、半透明、小菌落(MAC平板),XLD平板:不发酵乳糖的沙门菌志贺菌(红色菌落); 产生硫化氢的沙门菌(黑色菌落); 发酵糖类产酸的大肠杆菌(黄色菌落),培养特性,4、生化反应 发酵葡萄糖、硝酸盐还原阳性、动力阳性、 KIA:K A +/- +/-、 IMVC:- + - -或- + - +、 赖氨酸脱羧酶阳性、脲酶阴性、氧化酶阴性,伤寒沙门菌 KIA(K A)MIU(+ - -),伤寒沙门菌IMViC试验(),(K A)表示葡萄糖+ 、乳糖-、 不产气 、 产H2S MIU表示动力、 吲哚、 尿素 IMViC表示吲哚 、MR 、VP 、枸椽酸盐,常见沙门菌的主要生化特性,微生物学检验,一、标本采集 二、检验程序及鉴定步骤 三、抗体检测(肥达反应),伤寒病人标本采集原则,伤寒和副伤寒 食物中毒 败血症 第1周取血液 可疑食物 血 第2周起取粪 呕吐物 第3周起取尿液 全程取骨髓,检验程序,标本,选择性平板、BA

      7、P,生化反应,血清学鉴定,KIA/MIU、 IMViC等,玻片凝集试验,增菌,涂片染色药敏,分离培养,1、血液、骨髓 胰酶大豆蛋白肉汤 2、粪便、肛拭 GN肉汤或亚硒酸盐肉汤 肠道选择培养基: MAC、EMB:无色半透明小菌落; SS:无色半透明或中央黑色菌落; XLD:红色或中央黑色菌落。,床边接种,生化反应,1、初步生化: KIA:葡萄糖 乳糖-、产气(伤寒除外)、H2S/- MIU: 动力、吲哚-、脲酶- IMViC: /- 2、全面生化鉴定到种:,生化反应,志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应,双糖铁琼脂,1-对照 2-铜绿 3志贺菌 4沙门菌5大肠 6-变形,血清鉴定,1、初步血清定群: 采用多价O抗血清(AF群)和单价O抗血清定群 2、再用H单价(因子)血清结合Vi血清确定血清型,沙门菌的血清学分型,组 菌名 O抗原 H抗原I H抗原II A 甲型副伤寒 1、2、12 a B 乙型副伤寒 1、4、5、12 b 1、2 鼠伤寒沙门菌 1、4、5、12 i 1、2 C1 希氏沙门菌 6、7、Vi c 1、5 猪霍乱(副伤寒C) 6、7 c 1、5 D 伤寒沙门菌 9、12、Vi d

      8、 肠炎沙门菌 1、9、12 g、m E1 鸭沙门菌 3、10 e、h 1、6,沙门菌血清学鉴定:抗血清+待检细菌,阳性,阴性,抗体检查,肥达试验Widal test,原理:用已知伤寒沙门菌O、H抗原和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的H抗原,检测病人血清中相应抗体的半定量凝集试验,用途:辅助诊断伤寒、副伤寒,肥达反应(Widal test),O凝集 (1:201:1280,效价1:80),H凝集 (1:201:1280,效价1:320),肥达试验结果判断,正常抗体水平 O 1:80;H1:160;A、B、C1:80 动态观察 H 与O 抗体的比较 O抗体:IgM型,出现早,消失快 H抗体:IgG型,出现晚,消失慢,肥达试验结果分析,1、效价递增或恢复期比初次4倍 有诊断意义 2、 O、H均升高:伤寒、副伤寒 O不高,H高:回忆反应 O高,H不高:感染早期或交叉反应, 一周后复查,H升高可诊断 3、 O、H均不高者少见,结果分析,结果分析与报告,1、从血及骨髓中分离出伤寒沙门菌应及时报 告并隔离病人 2、 培养(-),O1:80,H 1:160,伤寒 A、B、C :H 1:80,甲、乙、丙副伤寒

      9、 3、沙门菌胃肠炎或食物中毒:从腹泻患者粪 便、呕吐物及残余食物中培养出非伤寒或 副伤寒沙门菌 4、伤寒携带者:从无症状患者粪便或胆汁中 分离出伤寒沙门菌,第六节 耶尔森菌属 Yersinia,法国学者耶尔森,1894年发现鼠疫杆菌(鼠疫巴斯德氏菌,又称鼠疫耶尔森菌)。日本的北里柴三郎也几乎同时在香港作出同一发现。,鼠疫耶尔森菌的发现,从公元619 世纪发生过3 次大流行 哈尔滨1910年鼠疫事件卷走了6万余人性命的灾难。 目前我国在青海和其他个别地区有少数散在病例。,伍连德,鼠疫耶尔森菌的流行情况,2014年7月,酒泉玉门市发生一例鼠疫病例。,鼠疫耶尔森菌的流行情况,一、分类: 11个菌种 引起人类致病的有3种: 鼠疫耶尔森菌(Y.pestis)、 小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)、 假结核耶尔森菌(Y.pseutuberculosis)。,耶尔森菌属(Yersinia),鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis),概述 鼠疫耶尔森菌(Y. pestis),俗称鼠疫杆菌,是鼠疫的病原菌。鼠疫是一种人兽共患的自然疫源性烈性传染病,人类鼠疫多为疫鼠的跳蚤叮咬而感染,是我国法定的甲类传染病。此菌引起的是啮齿动物中的自然疫源性疾病,传染性强,病死率高,易酿成大流行。此菌主要累及皮肤和淋巴结,其次为败血症、肺炎、脑膜炎。,鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis),传染源:患病的鼠类和人 传播媒介:鼠蚤 传染途径: 带菌鼠蚤的叮咬 人与染疫动物(啮齿动物、黄鼠属、旱獭属)接触或与病人接触所致。,鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis),临床类型 腺鼠疫嗜淋巴组织性特征性淋巴腺肿局部淋巴结肿胀、坏死和脓肿。 传播途径:鼠-蚤-人,鼠

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