分解纤维素的微生物的分离讲课课件
61页1、,课题3,分解纤维素的微生物的分离,(一)纤维素与纤维素酶,1、纤维素: 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。广泛地存在于植物的根、茎、叶等器官中。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,,2、纤维素酶:,一、基础知识,纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,3、纤维素的分解,能分解纤维素的微生物有各种细菌、真菌和少数放线菌。,纤维素,纤维二糖,葡萄糖,草食性动物是怎样消化食物中纤维素的?,在草食性动物等的消化道内,共生有分解纤维素的微生物,其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素,而人没有分解纤维素的能力。,甲 乙,在2支20mL的试管中,分别放入16cm的滤纸条,再分别加入pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在加入10mL缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶(7080U/mL)。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中,在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h,观察结果。,4、纤维素酶活性的测定实验:,纤维素酶活性的测定实验:,滤纸崩溃法
2、,练一练:,1.下列关于纤维素酶的说法,错误的是,A. 纤维素酶是一种复合酶,至少包括三种 B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,2、下列生物能分解纤维素的是( ) 人 兔 牛 蘑菇 纤维杆菌,A. B.,C. D.,C,.纤维素分解细菌的筛选:,1.方法:,刚果红染色法这种方法能够通过颜色 反应直接对微生物进行筛选,刚果红可以与纤维素形成红色复合物,当纤维素被纤维素酶分解后,红色复合物无法形成,出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,2.原理:,讨论:,1.纤维素酶的种类及怎样分解纤维素? 2.刚果红怎样选择纤维素分解菌的作用? 3.旁栏思考题 4.选择培养中思考题,利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌,下列说法错误的是,A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D. 若培养基上产生了透明圈,则说明已筛选出了纤维素分解菌,练一练:,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培
3、养基上,挑选产生透明圈的菌落,二、实验设计,(此步可以省略),提示:课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培养基上,直接分离得到菌落。 本课题先通过选择培养,使纤维素分解菌得到增殖后,再将菌液涂布在鉴别培养基上。其他步骤基本一致。,旁栏思考题本实验的流程与课题2中的 实验流程有哪些异同?,纤维素分解菌大多分布在_ _的环境中。采集土样时,应选择富含纤维素的环境。如树林中多年落叶形成的腐殖土,多年积累的枯枝败叶等等。也可将滤纸埋在土壤中一个月左右,这样会有能分解纤维素的微生物生长。,【资料一】土壤取样,富含纤维素,旁栏思考题为什么要在富含纤维素的环境中找纤维素分解菌?,根据生物与环境的互相依存关系,在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。,旁栏思考题将滤纸埋在土壤中有什么作用?你认为滤纸应该埋进土壤多深?,人工设置适宜环境,使纤维素分解菌相对聚集。将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,(此步可以省略),增加纤维素分解菌
4、的浓度,以确保能够从样品中分离所需要的微生物。,1、目的:,【资料二】选择培养,(富集培养),根据样品中目的菌株数量来确定是否需要,参照课本29页旁栏中的比例配置,回答下列问题,a、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基?为什么?,是液体培养基,原因是配方中无凝固剂。,b、这个培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有,是如何进行选择的?,有选择作用,本配方中的碳源是纤维素,所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖。,c、你能否设计一个对照实验,说明选择培养基的作用,以不含纤维素的培养基作为对照,如用牛肉膏蛋白胨培 养基与之对照,操作提示,选择培养的操作方法,将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中,将锥形瓶固定在摇床上,在一定温度下振荡培养1-2d,直至培养液变混浊。 吸取一定量的培养液,转移至另一瓶新鲜的选择培养基中,以同样的方法培养到培养液变混浊。,旁栏思考题为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物? 在选择培养的条件下,可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用。,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品
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