分子标记-RAPD和ISSR课件
21页1、分子标记技术,-RAPD-PCR、ISSR-PCR,王春玲,指导老师:王慧中 应奇才,分子标记概述,分子标记是遗传标记中非常重要的一种,它是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记,是DNA水平遗传多态性的直接的反映。 优点:它直接以DNA形式出现,不受限制,不存在表达与否的问题;数量极多,基因组变异极其丰富,分子标记的数量几乎是无限的;多态性高,利用大量引物、探针可完成覆盖基因组的分析;,分子标记类型,现在的DNA标记技术已有几十种,主要有一下几大类。 一、基于分子杂交的分子标记这类标记利用限制性内切酶酶切及凝胶电泳分离不同生物体的DNA分子,然后用特异探针进行杂交,通过放射性自显影或非同位素显色技术揭示DNA的多态性。 (一)限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP) (二)小卫星DNA(Minisatellite DNA),二、基于PCR技术的分子标记,随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)、简单重复序列(Simple Sequence Re
2、peat,SSR) 、扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP )、ISSR( inter-simple sequence repeat ),(1)随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD) RAPD是由Williams和Welsh(1990)同时发展起 来的一项新的建立于PCR实验基础上的检测基因组DNA多态性的遗传标记技术。 基本原理 该技术利用大量的、各不相同的,碱基顺序随机排列的寡聚单核苷酸链为引物(约810 个碱基) ,以待研究的基因组DNA片段为模板,进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离,可对基因组DNA进行多态性分析。,RAPD (random amplified polymorphic DNA),RAPD所使用的引物各不相同,但对任一特定引物,它在基因组DNA序列上有其特定的结合位点,这些特异的结合位点在基因组某些区域内的分布如符合PCR扩增反应的条件,即引物在模板的两条链上有互补位置,且引物3端相距在一定的长度范围内,就可以扩增出DNA片段
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