血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验25039
4页1、最新资料推荐血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验一实验原理1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定 pH 条件下,不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷,因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同,即它们的电泳迁移率不同,因此,可使它们分离。2、影响电泳迁移率的外界因素:电场强度、溶液的pH 值、溶液的离子强度和电渗现象。3、影响电泳迁移率的内在因素:质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高,对样品无拖尾和吸附现象等优点。5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构,厚度约为120 m,有很强的通透性,对分子移动阻力很小。6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物, 分离各种血清蛋白。 血清中含有清蛋白、 -球蛋白、-球蛋白、 -球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同, 在电场中的迁
2、移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清在pH8.6 的缓冲体系中电泳,染色后可显示5 条区带。其中清蛋白的泳动速度最快,其余依次为 1-、 2-、 -及 -球蛋白。二实验仪器和试剂器材醋酸纤维素薄膜(38cm),培养皿,载玻片,电泳仪,电泳槽,粗滤纸,镊子材料新鲜血清(未溶血)试剂1、巴比妥缓冲液 ( pH 8.6,离子强度 0.06):巴比妥 1.66g, 巴比妥钠12.76g,加水至1000ml 。置 4冰箱保存,备用。 (已配置)2 、 染 色 液 : 氨 基 黑10B0.5g,甲 醇50ml,冰 醋 酸10ml , 蒸 馏水 40ml ,混匀。3、漂洗液 :含 95乙醇 45ml,冰醋酸 5ml ,蒸馏水 50ml ,混匀。4、NaOH 溶液:称取 NaOH 16g ,定容至 1000ml 。三实验过程一 .准备与点样1.将薄膜剪成3 8cm 的小条,在薄膜无光泽面距一端1.5cm 处用铅笔轻轻划一条直线,表示点样位置。1最新资料推荐2.将薄膜无光泽面向下,浸泡于 PH8.6 的巴比妥缓冲液中至少十分钟,使之完全浸泡透。3.将浸泡的薄膜取出,用滤纸吸去多余水分。用毛细
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