{企业并购重组}第13章基因重组和基因工程
129页1、基因工程与基因体外表达 Genetic Engineering and gene expression in vitro,第13章,重组DNA技术的发展史,1865年 G.J.Mendel的豌豆杂交试验。 1944年 O.T.Avery的肺炎球菌转化实验。 1973年 美国斯坦福大学的科学家构建第一个重组DNA分子。 1977年 美国南旧金山由博耶和斯旺森建立世界上第一家遗传工程公司,专门应用重组DNA技术制造医学上重要的药物。 1980年 开始建造第一家应用重组DNA技术生产胰岛素的工厂。 1997年 英国罗林研究所成功的克隆了多莉。,1972年,P.Berg: 构建第一个DNA重组分子,1997年,动物克隆: 克隆羊多莉,1977年,基因工程产品的出现 H.W.Boyer,第一个基因工程产品(SS),1973年,S.S.Cohen:第一个基因克隆实验,2001年,人类基因组计划,一、重组DNA技术相关概念,克隆(clone):来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。,获取同一拷贝的过程称为克隆化(cloning),即无性繁殖。,(一) DNA克隆,技术水平:分子克隆(molecular
2、 clone) (即DNA 克隆) 细胞克隆 个体克隆(动物或植物),应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA)与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子复制子(replicon),继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一DNA分子,也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。,DNA克隆,生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等。,目的: 分离获得某一感兴趣的基因或DNA 获得感兴趣基因的表达产物(蛋白质),基因工程(genetic engineering) 实现基因克隆所用的方法及相关的工作称基因工程,又称重组DNA工艺学。,重组DNA技术基本原理,基本原理,第一节 基因克隆是利用工具酶 进行操作,工具酶,限制性核酸内切酶 DNA聚合酶 逆转录酶 T4DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶,限制性核酸内切酶(restriction endonuclease),限制性核酸内切酶(restriction endonuclea
3、se, RE)是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。,GGATCC CCTAGG,G CCTAG,GATCC G,+,Bam H,定义:,与甲基化酶共同构成细菌的限制修饰系统,限制外源DNA,保护自身DNA。,、(基因工程技术中常用型),分类:,作用:,第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写; 第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写; 第四个字母代表株; 用罗马数字表示发现的先后次序。,命名:,Hin d,属 系 株 序,Haemophilus influenzae d株 流感嗜血杆菌d株的第三种酶,II型限制性核酸内切酶: 能识别DNA分子内部的特异性位点和切割双链DNA, 其切割位点的序列可知、固定。,Bam H,GTC CAG,G CCTAG,GATCC G,+,GGATCC CCTAGG,Hind,GTCGAC CAGCTG,GAC CTG,+,平端切口,粘端切口,来源不同的限制酶,但能识别和切割同一位点,这些酶称同功异源酶。,GGATCC CCTAGG,G CCTAG,GATCC G,+,Bam H,GGATCC CCTAGG,G CCT
4、AG,GATCC G,+,Bst,同功异源酶:,有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同,但切割DNA后,产生相同的粘性末端,称为同尾酶。这两个相同的粘性末端称为配伍未端(compatible end)。,Bam H,Bg l,GGATCC CCTAGG,AGATCT TCTAGA,G CCTAG,GATCC G,+,+,A TCTAG,GATCT A,同尾酶,限制性内切核酸酶,重组DNA技术中常用的工具酶,第二节基因克隆需要特定的载体,克隆载体(cloning vector) 为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。,表达载体(expression vector) 为使插入的外源DNA序列可转录翻译成 多肽链而特意设计的载体称为表达载体。,载体的选择标准:,能自主复制; 具有两个以上的遗传标记物,便于重组体的筛选和鉴定; 有克隆位点(外源DNA插入点),常具有多个单一酶切位点,称为多克隆位点; 分子量小,以容纳较大的外源DNA。,质粒 (plasmid),特点: 能在宿主细胞内独立自主复制;带有某些遗传信息, 会赋予宿主细胞一些遗传性状。,多克隆位点,ori,复制起
《{企业并购重组}第13章基因重组和基因工程》由会员精****库分享,可在线阅读,更多相关《{企业并购重组}第13章基因重组和基因工程》请在金锄头文库上搜索。
(2020年){生产工艺技术}我国传动带工艺装备现状与展望
(2020年){安全生产管理}食品安全性管理的发展趋势
(2020年){安全生产管理}白国周本质安全人的楷模
(2020年){技术规范标准}社会体育指导员技术等级制度与职业标准
(2020年){约束理论}与用于矿井通信的对比分析
(2020年){生产管理知识}生产系统的布局
(2020年){生产管理知识}目前国内外乙二醇生产企业产需现状分析
(2020年){生产管理知识}俄罗斯石油资源生产及供需形势研究
(2020年){生产管理知识}公共工程技术讲义库作业导言
(2020年){安全生产管理}移动互联网打响安全保卫战成为主战场图
(2020年){生产管理知识}某某电机制造厂生产档案管理讲义
(2020年){生产现场管理}某市风神汽车新发动机加工车间施工组织设计
(2020年){生产管理知识}生产系统的布局与布置
(2020年){生产现场管理}现场七大效率损失改善法分
(2020年){安全生产管理}安全现状评价报告
(2020年){安全生产管理}安全生产制度档案
(2020年){安全生产管理}级风机独立安全链中基于
(2020年){生产管理知识}对建筑门窗物理三性现场检测的体会
(2020年){安全生产管理}某自来水公司水厂液氯储存和使用装置安全现状评价报告
(2020年){生产管理知识}载于六届全国新型干法水泥生产技术交流会论文集
2023-09-06 18页
2023-09-06 16页
2023-09-06 27页
2023-09-06 19页
2023-09-06 15页
2023-09-06 18页
2023-09-06 18页
2023-09-06 15页
2023-09-06 20页
2023-09-06 18页