《红掌组培快繁技术规程》

1、ICS65.020.20B 05DB34安徽省地方标准DB 34/T XXXXX2020红掌组培快繁技术规程Technical regulations for tissue culture and rapid propagation of Anthurium andraeanum2020 - XX - XX发布2020 - XX - XX实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T XXXXX2020前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由阜阳师范大学提出。本标准由安徽省林业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农之源生态农业有限公司、阜阳师范大学、安徽科技学院、安徽省农业科学院。本标准主要起草人：兰伟、郑萍、凌飞东、张远兵、刘晓艳、谢欣雨、黄才华、张源、胡新、任杰、王先亮、陈竹、徐厚刚、高俊兰。IDB34/T XXXXX2020红掌组培快繁技术规程1 范围本标准规定了红掌（Anthurium andraeanum）组培快繁的组培工厂、培养基的配制、外植体接种与继代、组培苗分级、组培苗炼苗、组培苗移栽与管理、成苗标准。本标准适用于红掌组培苗工厂化生产。2 规

2、范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。JB/T 10594 日光温室和塑料大棚结构与性能要求3 组培工厂3.1 厂址选择选择交通便捷、地势平坦、周边安静、干净卫生、光照充足、通风良好、空气清新、水电配套、排水畅通，与污染源距离不小于500 m，且常年主风向为上风向的场地。 3.2 组培车间3.2.1 洗涤室3.2.1.1 功能：用于培养瓶的洗涤、干燥和存放。3.2.1.2 要求：宽敞明亮、通风良好、水电配套、排水畅通。墙面和地面应便于清洁，地面要做防滑处理。3.2.1.3 主要设备：洗瓶机、烘箱、小推车、毛刷。3.2.2 准备室3.2.2.1 功能：用于玻璃、塑料器皿及其他实验用具的清洗、干燥和保存；蒸馏水的生产、储存；药品的称量、溶解和配制；培养基的配制、分装、包扎和灭菌；外植体材料的预处理、培养材料的观察分析等。3.2.2.2 要求：空间较大、清洁明亮、通风良好、墙壁光滑、地面平坦。设有一个较大工作台和水池。3.2.2.3 主要设备：高压灭菌锅、微波炉、

3、托盘、水浴锅、蒸馏水器、冰箱、培养箱、电子分析天平、电子天平、电热磁搅拌器、酸度计、培养基自动定量灌装机。3.2.3 接种室3.2.3.1 功能：放置超净工作台，无菌条件下进行植物材料的消毒、接种、培养物继代转移，等。3.2.3.2 要求：干爽安静、清洁明亮，墙壁光滑平整，地面平坦无缝。3.2.3.3 主要设备：超净工作台、双筒实体显微镜或生物显微镜、空调、紫外灯、空气净化装置、镊子、剪刀。3.2.4 培养室3.2.4.1 功能：用于接种材料的无菌培养和观察。3.2.4.2 要求：控温、控湿、控光，温度2426，光照强度1500 lx5000 lx，光照时间10 h/d16 h/d。3.2.4.3 主要设备：紫外灯、空气净化装置、空调、程控定时器、温度计、湿度计。3.2.5 温室3.2.5.1 作用：用于组培苗的炼苗、移栽和生长，以及母本的保存。3.2.5.2 要求：温室建造按JB/T 10594的规定执行。根据实际情况可选择玻璃温室或薄膜温室，应具备夏季可调节室内温度至32以下，冬季可调节室内温度15以上的条件，可以喷水补湿，并且具有良好的防虫隔离条件。4 培养基的配制4.1 培养基

4、类型的选择选择MS培养基为基本培养基，培养基成分参见附录A。4.2 母液与激素的配制4.2.1 大量元素母液的配制按10 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4冰箱中备用。4.2.2 微量元素母液的配制按100 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4冰箱中备用。4.2.3 有机母液的配制按50 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4冰箱中备用。4.2.4 铁盐的配制将硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠分别溶于蒸馏水中，加热不断搅拌，使完全溶解，冷却后，将两者溶液充分混合，定容至所需体积。按100 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4冰箱中备用。4.2.5 6-BA（6-苄氨基嘌呤）的配制称取50 mg 6-BA，先用少量1 mol/L盐酸溶解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.5 mg/ml 。4.2.6 NAA（萘乙酸）的配制称取10 mg NAA，先用少量1 mol/L 氢氧化钠溶解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.1 mg/ml。4.2.7 KT（激动素）的配制称取10 mg KT，先用少量1 mol/L盐酸溶解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.1 mg/ml。4.2.8 2,4

5、-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的配制称取10 mg 2,4-D，先用少量95%乙醇溶解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.1 mg/ml。4.3 培养基配方4.3.1 愈伤组织诱导培养基：MS6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L。4.3.2 分化培养基：MS6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/ml4.3.3 继代增殖培养基：MS6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.2 mg/L。4.3.4 生根培养基：1/2 MSNAA0.2 mg/LAC（活性炭）0.3。注： 以上培养基均含3.0 蔗糖, 0.5卡拉胶，培养基pH值均为5.8。培养基配制完毕后，分装至组培瓶中。在121下高温灭菌15 min20 min，并尽快取出使其冷却备用。5 外植体接种与继代5.1 外植体选取和清洗在生长健壮、无病虫害的红掌植株上，选取刚展开的幼嫩叶片，流水下冲洗15 min20 min。5.2 接种工具的消毒接种前，将剪刀、镊子等接种工具在高压灭菌锅中灭菌，取出后浸入75的乙醇中；接种时，再进行燃烧灭菌，然后在无菌工具放置架上放凉备用。燃烧时应注意进入乙醇的一端斜向

6、下进行，不可倒置，防止烧伤。5.3 外植体的消毒在已灭菌的超净工作台上，用无菌滤纸吸干叶片表面水分，浸入70乙醇中表面消毒15 s20 s，再浸入2.0次氯酸钠溶液消毒15 min20 min，无菌水冲洗45 次，置于无菌滤纸上吸干叶片表面水分待用。消毒时间应根据生长季节和材料的带菌程度灵活调整，如接种后污染严重则相应增加灭菌时间。5.4 外植体的接种将叶片切成1.0 cm1.0 cm见方小块，接种至愈伤组织诱导培养基上。每瓶培养基接种23 个外植体。接种后，在瓶子的下角用记号笔标记接种材料、培养基编号、操作人员编号以及接种时间等信息。5.5 愈伤组织诱导培养外植体接种后30 d左右，切口部分膨大，逐渐产生少量黄色泡状愈伤组织，再继续培养20 d30 d，泡状愈伤组织形成浅绿色瘤状突起，然后愈伤组织逐渐出现粒状突起，形成芽眼，并分化成芽。5.6 愈伤组织分化培养将诱导出的愈伤组织块切成带有3 5 个芽眼的小块，转接到愈伤组织分化培养基上，继续培养，开始产生芽丛，当幼苗生长至1.0 cm时，把芽丛转入继代增殖培养基。5.7 继代增殖培养选取长势良好、状态一致且带有芽丛的愈伤组织切割成1.

7、0 cm1.0 cm见方大小接种至继代增殖培养基上培养。每45 d左右可继代一次。愈伤组织继代次数控制在8代以内。5.8 生根培养将苗高3.0 cm以上，生长健壮、长势一致的无根组培苗，转接到生根培养基中，30 d左右，可进入温室驯化。5.9 培养条件培养温度为2426，光照强度2000 lx3000 Lx，光照时间12 h/d。6 组培苗分级根据组培苗苗高、植株长势、叶片色泽，生产中可将红掌组培苗分为一级苗、二级苗、三级苗和不合格苗，通常一级苗苗高4.0 cm以上（含4.0 cm），二级苗苗高3.0 cm4.0 cm（含3.0 cm），三级苗苗高2.0 cm3.0 cm（含2.0 cm），苗高2.0 cm以下为不合格苗。7 组培苗炼苗当组培苗苗高3.0 cm6.0 cm，具有34片叶和34条根时，便可移栽。为了保证其成活率，常在瓶苗出瓶以前，先在温室内把培养瓶盖全部打开或半打开，一般为3 d5 d，在培养基发霉前移栽。8 组培苗移栽与管理8.1 基质消毒 用40甲醛稀释50倍液均匀喷洒于基质上，充分搅拌均匀后用薄膜密封，堆置5 d后，揭开薄膜摊开基质，1 d翻动12次，7 d后使用。

8、8.2 移栽炼苗后，用镊子将组培苗从培养基中取出，洗掉基部附着的培养基，置于0.1高锰酸钾溶液中浸泡3.0 min5.0 min，在温室内，栽植于穴盘基质中。基质以草炭土与珍珠岩体积比为5：2混合，或草炭土与椰糠体积比2：1混合为宜，pH值在5.56.0之间。基质在使用之前，要求进行彻底消毒。8.3 管理8.31 初期管理组培苗移栽后，需及时浇透水，30 min60 min后，立即喷施一遍体积比800倍1000倍多菌灵或百菌清。然后根据天气情况，每天浇水24次。水质要求EC值小于0.5 mS/cm，pH值为5.06.5。环境的昼夜温度分别是2025和 1820。相对湿度保持在8590。移栽初期1 d5 d内，光照强度控制在2000 lx2500 lx；5 d10 d 内光照强度控制在3000 lx4000 lx。8.32 常规管理10 d后转入日常常规管理，即光照强度控制在6000 lx8000 lx，68月控制在8000 lx10000 lx左右，其他时间控制在10000 lx12000 lx左右。根据天气情况，35日通过喷雾1次。湿度控制在80左右。9 成苗标准根据植株长势、苗高和叶片数，生产中可将红掌组培穴盘苗分为一级成苗、二级成苗、三级成苗和不合格成苗，通常一级成苗苗高8.0 cm10.0 cm（含8.0 cm），叶片数5片；二级成苗苗高6.0 cm8.0 cm（含6.0 cm），叶片数3片5片；三级成苗苗高小于6.0 cm，叶片数3片。AA附录A （资料性附录）MS培养基成分表见表A.1。表A.1 MS培养基成分表单位：mg/L成分含量大量元素硝酸钾KNO31900硝酸铵NH4NO31650硫酸镁MgSO47H2O370磷酸二氢钾KH2PO4170氯化钙CaCl22H2O440微量元素硫酸锰MnSO44H2O22.3硫酸锌ZnSO47H2O8.6硼酸H3BO36.2碘化钾KI0.83钼酸钠Na2MoO42H2O0.25硫酸铜CuSO45H2O0.025氯化钴CoCl26H2O0.025铁 盐乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.25硫酸亚铁FeSO47H2O27.85有机成分甘氨酸2.0盐酸硫胺素0.1盐酸吡哆醇0.5烟酸0.5肌醇100_5

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