-_植物组织培养中常见问题及解决办法.ppt
36页1、第五节植物组织培养中常见问题及解决办法 组织培养中常见的问题 一 污染的问题二 褐化的问题三 玻璃化的问题四 其它问题 一 污染 一 污染的原因 含义 组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌 导致培养失败的现象 来源 细菌 真菌及其它微生物 原因 一是接种材料 外植体 带菌 二是培养基 接种器具带菌 三是操作人员接种不规范引起 1 细菌污染 症状 培养基或外植体上出现粘液状或水迹状物 有强烈的酸臭味 多在污染后 天内发生 原因 外植体灭菌不彻底 培养基灭菌不彻底 接种用具灭菌不彻底 母瓶带菌 传播 介质 细菌污染 2 真菌污染 症状 培养基或外植体表面出现白 黑 绿等色的块状菌丝 孢子 接种后 天内发生 原因 接种空间不够密闭 室内潮湿 霉菌繁衍多 材料带菌 无菌操作不正确 传播 空气 真菌污染 真菌污染 二 污染的预防措施 1 防止材料带菌 避免阴雨天在室外采集外植体 春秋季节取材 材料预培养 2 严格外植体灭菌3 培养基 含接种用具 灭菌彻底4 严守无菌操作规程5 保持接种室 培养室清洁6 培养物污染后应及时高压灭菌后再处理 二 褐化及其防止措施 褐化 材料接种后 其表面开始褐变
2、有时甚至会使整个培养基褐变的现象 机理 植物组织中的多酚氧化酶被激活 产生醌类物质 呈棕褐色 当扩散到培养基后 会抑制其他酶的活性 从而影响接种外植体的培养 一 褐变的原因 植物品种 基因型 生理状态培养基成分培养条件 1 植物品种 由于多酚氧化酶活性上的差异 有些品种的外植体在接种后较易褐变 而有些品种的外植体在接种后不易褐变 2 生理状态 一般来说 老熟的组织在接种后褐变程度较幼嫩组织严重 3 培养基成分 浓度过高的无机盐会使褐化程度增加 细胞分裂素水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性 从而使褐化现象加深 4 培养条件不当 光照过强 温度过高 培养时间过长等 均可加速被培养的外植体的褐变程度 二 减轻褐变现象发生的方法 1 合适的外植体 一般来说 最好选择生长处于旺盛的外植体 2 合适的培养条件 合适的无机盐成分 植物激素水平 温度等均可以减轻材料的褐变现象 外植体诱导初期采取暗培养或弱光下培养可有效降低褐变现象的发生 二 减轻褐变现象发生的方法 3 使用抗氧化剂 在培养基中 使用半胱氨酸 抗坏血酸等抗氧化剂能够有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象 培养基中添加0 1 0
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