北京耐多药肺结核控制项目试验室相关问题
73页1、结核病细菌学检验的标准化 与新诊断技术进展 王甦民 2012年4月 强化结核病实验室诊断标准化的必要性 1、全球结核病控制的三大挑战:耐药 结核病、HIV/艾滋病合并结核病、移民( 流动人口) 2、我国结核病疫情依然严重 3、目前结核病实验室诊断技术的不足 分类 结核分枝杆菌属原核生物界、厚 壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝 杆菌科的分枝杆菌属,分枝杆菌属种 类甚多,目前已命名的有200多种, 一般可分为缓慢生长和快速生长两大 类。 结核分枝杆菌特点 q结核菌生长缓慢,在一般培养基上 分裂一代需要10-20小时 q细胞壁厚度为1035nm,较一般细 菌的细胞壁厚,含有大量脂类,具有 坚韧性和疏水性。 q抗酸性是分枝杆菌的重要特征。 结核病细菌学检查的重要作用 细菌学检查是结核病最客观、最科学 和最重要诊断方法和流行病学研究工具。 因此结核病的实验室检验仍然面临着较多 的问题。 细菌学检验存在的问题 不易于标准化 操作误差较大(可达到30%) 1、个人操作误差 2、标本性状 3、标本来源 对结果的理解差异可影响检验结果对 临床治疗的参考或指导意义。 主要的细菌学检验技术 1、痰涂片抗酸染
2、色、镜检技术 2、分枝杆菌分离培养技术 3、分枝杆菌快速培养技术 4、药物敏感性实验技术 5、分枝杆菌菌种鉴定技术 标准的痰涂片抗酸染色、镜检技术 标本的收集,特别是痰标本的采集、 保存 制片和染色过程的标准化 读片操作的熟练程度和标准化 对结果的理解 痰标本的采集、保存和运送 k脓样、干酪样或脓性粘液样痰为合格标本,痰 量应为3-5毫升。 k难以获得合格标本时,也应进行细菌学检查, 但应注明标本性状,以供分析结果时参考。 k容器上应注明与检验单一致的病人姓名、编号 及日期。 k不能及时检验的痰标本应置4C冰箱保存, k如需转运,外送前要认真核对检验单与痰瓶上 标注,放在专用的转运箱内运送。 标本的采集 标本留取方法 痰标本的留取应在医护人员的指导下进行 。医护人员应告知病人如何咳痰,合格的痰标 本是深呼吸后,由肺部深处咳出的分泌物,并 说明唾液检出的可能性很小。 检验人员检查痰标本的性状,并在登记本 和检验报告单上注明(按干酪痰、血痰、黏液 痰和唾液分类登记)。 如何正确留痰 查痰对于结核病的诊断是非常重要的,通过痰检可以知道您是否痰 中带菌。如果痰中带有结核菌说明您患有肺结核,具有
3、传染性,应该及时遵医 嘱治疗。 送检痰标本的质量直接影响检验结果的准确性。请您一定按照下 列要求和方法留取合格的痰标本。每个痰盒应分别留取12口痰,请不要将1口 痰分开放到2或3个痰盒中。 正确的咳痰方法: 1、咳嗽前应缓慢地深吸气,吸气后稍屏气片刻。 2、躯干略向前倾,两侧手臂屈曲,平放在两侧胸壁下部,内收并 稍加力。 3、咳嗽时腹肌用力快速收缩,使腹壁内陷。一次深吸气,可连续 咳嗽三声。 4、停止咳嗽后,收缩腹肌将剩余的气体尽量呼尽。 5、重复缓慢吸气动作或平静呼吸片刻,准备再次咳嗽的动作。 * 注意:部分人如果忽然深吸气容易诱发咳嗽,您可以尝试缓慢或分几 次吸气,争取肺泡内充分充气,以增加咳嗽的效率。在这一过程中,要注意动 作的连贯性,一气呵成。同时,也可以叩击前胸,或由家属协助叩击后背胸壁 。这样震动支气管内的分泌物,能够增加咳嗽排痰的力度。 直接痰涂片检查法 萋尔-尼尔逊氏(ZiehlNeelsen)抗 酸染色法 (热染法) 细菌学常规检查 直接涂片法 操作流程 涂 痰 膜 自 然 干 燥 复 红 加 热 初 染 5 分 钟 自 然 干 燥 镜 检 流 水 冲 洗 美 兰 复
4、 染 30 秒 盐 酸 酒 精 脱 色 流 水 冲 洗 流 水 冲 洗 载玻片 (一)新载玻片必须经95%乙醇脱脂,检查无划 痕后 方可使用。 (二)一张载玻片只能涂抹1份痰标本。 (三)载玻片只允许一次性使用,严禁清洗后重 复用于AFB检查。 (四)载玻片正面一侧1/3处标注实验室序号(如 使用的载玻片一端无磨砂面,必须使用玻璃刻刀 注明编号;如使用的载玻片一端有磨砂面,可使 用2B铅笔在磨砂面上直接书写)。 (五)载玻片正面另一侧2/3中央处均匀涂抹成 面积为1020 mm的卵圆形痰膜。 染色 (一)严格按照操作规范完成染色程序 。 (二)染色后的痰膜应呈均匀亮蓝色, 无红色斑块。 (三)将染色后的玻片放置在报纸上, 如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字, 则表明该玻片涂抹过厚,或染色过程有 误。 (四)染色后的痰膜脱落部分应小于整 个涂抹面积的10%。 (一)为防止抗酸杆菌的交叉污染,严禁 油镜头直接接触玻片上的痰膜。 (二)仔细观察300以上的视野。 (三)每个工作日,一名镜检人员的玻片 阅读量一般不应超过25张。 (四)连续阅读1012张玻片后,应休息 20分钟左右。 镜检读片
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