磁性纳米四氧化三铁逆转SKOV3CDDP耐药性的初步研究
89页1、东南大学 博士学位论文 磁性纳米四氧化三铁逆转SKOV3/CDDP耐药性的初步研究 姓名:姜智 申请学位级别:博士 专业:内科学 指导教师:陈宝安 20091201 中文摘要 中文摘要 磁性纳米四氧化三铁逆转S K O V 3 C D D P 耐药性的初步研究 东南大学临床医学院 博士研究生:姜智 内科学 导师:陈宝安教授 目的:本课题旨在研究磁性纳米四氧化三铁( F e 3 0 4 m a g n e t i cn a n o p a r t i c l e s , F e 3 0 4 M N P s ) 是否可以逆转人卵巢癌耐药细胞株( S K O V 3 C D D P ) 的耐药性,并 探讨F e 3 0 4 M N P s 对S K O V 3 C D D P 耐药性的逆转作用与凋亡相关基因( Bc e l l l y m p h o m a l e u k e m i a2 ,B c l 2 ;S u r v i v i n ) 和核苷酸切除修复基因( e x c i s i o nr e p a i rc r o s s c o m p l e m e n t i n g
2、1 ,E R C C l ) m R N A 转录的影响,并进一步检测P 糖蛋白 ( P - g l y c o p r o t e i n ,P - g p ) 、肺抗药性相关蛋白( 1 u n gr e s i s t a n c e - r e l a t e dp r o t e i n ,L R P ) 和多药耐药相关蛋白( m u l t i d r u gr e s i s t a n c er e l a t e dp r o t e i n ,M R P l ) 表达水平,以探 讨它们逆转M D R 的作用机理,为载药纳米颗粒作为耐药逆转剂的临床应用提供理 论依据。 方法:将卵巢癌的耐药株S K O V 3 C D D P 细胞分为对照组、顺铂组( C D D P 组) 、 磁性纳米F e 3 0 4 颗粒组( F e 3 0 4 M N P s 组) 和C D D P + 磁性纳米F e 3 0 4 颗粒组( C D D P + F e 3 0 4 M N P s 组) 四个组。常规细胞培养,S K O V 3 C D D P 细胞与不同药物孵育后, ( 1 ) 采
3、用甲基四唑蓝法( m e t h y l t h i a z o l y lt e t r a z o l i u m ,M T T ) 法检测对药物对细胞 增殖的抑制作用影响,计算出其I C s o 和耐药逆转倍数;( 2 ) 2 0I t m o l LC D D P 和2 5 l a g m L F e 3 0 4 M N P s 分别作用S K O V 3 C D D P 后,采用流式细胞仪( f l o wc y t o m e t r y , F C M ) A n n e x i n V F n c P I 双染法检测细胞凋亡率;( 3 ) 电感耦合等离子体原子发射 光谱法( i n d u c t i v e l yc o u p l e dp l a s m a - a t o m i ce m i s s i o ns p e c t r o m e t r y , I C P - A E S ) 测定细 胞内铂含量检测细胞内C D D P 浓度;( 4 ) 采用半定量P C R ( r e v e r s et r a n s c r i p t a s e p
4、o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ,I m P C R ) 测定细胞B c l 2 ,S u r v i v i n 和E R C C1 基因m R N A 表达水平:( 5 ) 采用W e s t e r nb l o t 法测定P g P 、L R P 和M R P l 蛋白表达。 结果:( 1 ) C D D P 对S K O V 3 C D D P 细胞的抑制作用具有浓度依赖性,其I C 5 0 为 3 9 31I ,t m o l L 。C D D P 与F e 3 0 4 - M N P s 联合作用S K O V 3 C D D P 细胞,细胞抑制率随着 C D D P 药物浓度增加而逐渐增强,其I C s o 为1 7 4p m o l L 。C D D P 与F e 3 0 4 M N P s 联合 作用S K O V 3 C D D P 细胞的逆转倍数为2 2 5 9 。 ( 2 ) C D D P + F e 3 0 4 M N P s 组和C D D P 组细胞凋亡率与对照组有统计学差异 东南大学博士学位论文 (
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