精液的稀释

,精液的稀释,精液稀释的步骤,1.稀释前的准备工作 2.精液直观指标测定 3.活力测定 4.密度测定 5.精液的稀释 6.精液的分装 7.精液的保存 8.实验器材的清洗、消毒,1.稀释前的准备工作,稀释液的制备 每天进入实验室的第一件事就是制作稀释液。 稀释液有三个部分组成：稀释粉、二重蒸馏水、庆大霉素。 稀释粉：蒸馏水：庆大霉素=50g：1L：8万IU 当天制作当天用，不可放到第二天继续使用。制作好的稀释液放入37的恒温水浴箱里备用。,1.稀释前的准备工作,实验器材的准备 集精杯的制作：将采精袋放入集精杯内，将袋口少许外翻，将采精用的滤纸折成三角漏斗形状置于采精袋内并用橡皮筋固定即可。 将消过毒的酒精温度计、密度仪的玻璃管、稀释用的量杯以及制作好的集精杯放于37恒温箱中备用 将显微镜的恒温板打开调到37预热，并放入载玻片。,2.直观指标测定,采精室送来的精液应在最短的时间内进行稀释和保存，但在稀释前应对精液进行一些检查，以确定精液是否有使用价值 容量 新鲜精液容量应在100250ml；过多，可能是混有尿液或副性腺有炎症，过少，说明采精方法不当或公猪生精能力降低。 色泽 精液色泽应为乳白色或灰白色，红色说明有血液。绿色说明有脓液，清黄色说明有尿液；精液色泽越白越浓（可能偏黄）说明精子浓度越高。 气味 精液应没有明显异味，有腥味说明有脓液，有臊味说明混有尿液；,2.直观指标测定,3.活力测定,将精液轻轻摇动或用洁净的玻璃棒搅动，用微量移液器或玻璃棒取精液20uI，放于预温后载玻片中央，盖上盖坡片，在载物台上预温片刻，用推进器将载玻片推至物镜下，在100和400倍下进行观察。如果精子无凝集、出现大群运动波，无明显死亡精子。应为“很好” ；如果精液出现大群波动，但有少量死亡精子应为“好”；如果有成群运动，但有精子凝集现象，应为“一般”；有大片凝集或死亡，但有部分精子在正常运动应为“差”。,3.活力测定,注意事项： （1）显微镜的光源光圈应尽量小些，光线过强，就无法看清精子； （2）每次调节显微镜焦距时，都应先将载物台先调到与物镜最近的距离，但不能使载玻片与物镜接触，然后缓慢放低载物台，同时从目镜观察，直到观察到精子为止；观察活力时应轻轻调节微调，以观察各个层次的精子活动情况。,4.密度测定,精子密度：指每毫升精液中含有的精子量，它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.03.0亿毫升，有的高达5.0亿个精子/毫升。 利用光电比色法，以精子对光通透性差为依据，用分光光度计读出一个数字，然后再根据事先准备好的标准曲线确定精子的密度。,4.密度测定,4.密度测定,具体操作步骤： 首先打开密度仪放入专用玻璃管在玻璃管中加入稀释液至刻度线盖上盖并进行调零取下盖子用移液枪吸取200微升精液加入到玻璃管内混匀盖上盖子并按确认键经行测量利用测量值从密度表中查出对应精液密度,经过品质检查合格的精液应立即进行稀释。 确定精液的稀释份数与所加入稀释液的量。一般要求每份输精剂量为80ml，含有效精子40亿。例如：采得一头公猪的精液量为200ml，通过精液质量检查确定活率为0.7，其密度为2.0亿/ml，依据公式可得：理论稀释份数=200ml2.0亿/ml0.7÷40亿/份=8.7份,实际稀释份数=可根据实际情况在理论数的基础上保守约为8份。稀释液量=808-200=440ml。 稀释前，稀释液的温度应和精液接近，相差不能超过1。根据计算好的稀释头份，用量杯量取稀释液的体积，或简单一点，按1ML精液或稀释液约等于1克，用精密电子天平直接称量，国外专业公猪站多采用此法。,5.精液的稀释,5.精液的稀释,稀释时，将稀释液顺着盛放精液的量杯壁慢慢注入精液，并不断用玻璃棒搅拌，以促进混合均匀；不能将稀释液直接倒入精液，因精子需要一个适应过程。还有的做法是，先将稀释液慢慢注入精液一部分，搅拌均匀后，再将稀释后的精液倒入稀释液中，这样有利于提高精子的适应能力和稀释精液的均匀混合。 精液稀释的成败，与所用仪器的清洁卫生有很大关系。所有使用过的烧杯、玻璃棒及温度计，都要及时用蒸馏水洗涤，并进行高温消毒，是稀释后的精液能保证适期保存、利用的重要条件。,6.精液的分装, 精液的分装，有瓶装和袋装两种，装精液用的瓶子和袋子均为对精子无毒害作用的塑料制品。瓶装的精液分装时简单方便，易于操作，但输精时需人为挤、压或瓶底开口，因瓶子有一定的固体形态；袋装的精液分装一般需要专门的精液分装机，用机械分装、封口，但输精时因其较软，一般不需人为挤压。瓶子一般上面均有刻度，最高一刻度为80ML，袋子一般为80ML。 分装后的精液，要逐个粘贴标签，一般一个品种一个颜色，便于区分。注意要在上面标明公猪耳号、采精处理时间、稀释后密度、经手人等，并将以上各项登记到记录本上，以备查验。,6.精液的分装,7.稀释后精液的保存,分装后的精液，不能立即放入17左右的恒温冰箱内，应先留在冰箱外1小时左右，让其温度下降，以免因温度下降过快而刺激精子，造成死精子等增多。 放入冰箱时，不同品种的公猪精液应分开放置，否则匆忙中容易拿错精液。不论是瓶装的或是袋装的，均应平放，并可叠放。从放入冰箱开始，每隔12小时，要摇匀一次精液，因精子放置时间一长，会大部分沉淀。对于一般猪场来说，可在早上上班，下午下班时各摇匀一次。为了便于监督，每次摇动的人都应有摇动时间和人员的记录。 保存过程中，一定要时时注意冰箱内温度计的变化，以免因意想不到的原因而造成电压不稳而导致温度升高或降低。,8.实验器材的清洗、消毒,最后就是把实验器材进行清洗，消毒 所有器皿应用对皮肤危害性小的、易洗涤的清洁剂清洗，并用自来水冲净，再用蒸馏水冲洗三至四遍，玻璃用品干燥温度为100150 ；精液分装管使用后立即用蒸馏水冲洗，然后用75的乙醇冲洗一遍，沥净水分，再放入消毒柜中100 消毒1小时。,谢谢,