专题3：动物细胞融合与单克隆抗体

专题3：动物细胞融合与单克隆抗体,杂种植株,融合的原生质体AB,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,过程,植物细胞A,原生质体B,原生质体A,杂种细胞AB,去 壁,去 壁,人 工 诱 导,方法？,植物细胞B,植物体细胞杂交技术,纤维素酶、果胶酶等,物理法：离心、振动、电激等 化学法：聚乙二醇等试剂,筛选,动物细胞培养技术,动物细胞融合技术,制备单克隆抗体技术,动物细胞核移植技术,动物细胞工程常用技术,思考题,1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？,酶解法，如纤维素酶或果胶酶,2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？,无需，因为动物细胞无细胞壁,3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法,4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？,能 还可以利用灭活的病毒进行诱导,5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？,不能，只能形成杂种细胞,可用胰蛋白酶将细胞分散,（三）动物细胞融合技术,1.概念：,动物细胞融合（cell fusion）也称为细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。,结果：,“2个或多个动物细胞”“1个杂交单核细胞”,2、诱导方法,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。,举例： 仙台病毒,丧失感染性,保留融合活性,（诱导细胞融合）,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成单核杂交细胞,原理：细胞膜具有一定的流动性,有丝分裂,4、过程：,注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。,3、原理：,细胞膜的流动性,6、应用：,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。,特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。,5、意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,2019/6/20,（三）动物细胞融合（细胞杂交） 1、动物细胞融合的实质： 两个或多个动物细胞融合形成一个单核的杂种细胞 2、原理：动物细胞膜的流动性。 3、过程： 4、诱导融合的方法： 5、应用： 制备单克隆抗体。,物理：离心、振动、电刺激; 化学：聚乙二醇（PEG）; 生物：灭活的病毒.,1.什么是抗体？ 2.主要分布在哪里？ 3.由什么细胞产生,抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,（四）制备单克隆抗体技术,主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。,每一个浆细胞只能分泌一种抗体,4. 传统抗体的生产方法及缺陷？,反复注射抗原,不能无限增殖,产量低、纯度低 抗体特异性差,（1）血清抗体： （2）单克隆抗体：,(四)单克隆抗体,把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。 产量低，特异性差，纯度低，反应不够灵敏。,用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，即通过克隆形成细胞群，就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体,免疫,制备,融合,筛选,筛选,克隆培养,单克隆抗体的制备,抗原,小鼠,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,细胞融合，筛选,细胞培养,筛选，继续培养,体外培养,体内培养,单克隆抗体,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,单克隆抗体的应用,既不损伤细胞，又减少了用药剂量， 疗效高、毒副作用小的新型药物,优点：准确、高效、简易、快速,2019/6/20,(四)单克隆抗体 1、原理:(1)效应B细胞能产生抗体但不能无限增殖。 (2)骨髓瘤细胞不能产生抗体但能无限增殖。 (3)杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。 2、过程： 3、筛选的方法：特定 的选择培养基；抗原 与抗体阳性检测。 4、应用：疾病的检测、 诊断、治疗等。,