抗人球蛋白实验

抗人球蛋白实验,概述,抗人球蛋白实验（AGT）,又称Coombs试验，是不完全抗体的一种很好方法。抗人球蛋白是用人血清免疫家兔，产生的抗人球蛋白抗体，即抗人球蛋白血清。可检测体内致敏的RBC(直接抗人球蛋白实验)和体外致敏的RBC(间接抗人球蛋白试验)。,实验原理,直接抗人球蛋白试验是用抗球蛋白试剂直接和待检RBC进行反应，目的是检测RBC上是否存在免疫球蛋白，该试验是免疫血液学最长用的试验之一。大多免疫抗体为IgG类，分子量小,与RBC相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称为不完全抗体。但在抗-IgG（抗人球蛋白抗体）参与下，通过抗人球蛋白的桥连作用，可使RBC与相应抗体（IgG）反应出现肉眼可见的凝集。,仪器及用具：小试管、吸管、离心机、37水浴箱、显微镜、冰箱等。,试剂,（1）抗球蛋白试剂。 抗球蛋白试剂通常有三种：多特异性抗球蛋白试剂（简称：多抗，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用）、单特异性抗-IgG试剂（简称：抗-IgG）和单特异性抗-C3试剂（简称：抗- C3）。多抗包括了抗-IgG和抗- C3两种成分，在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要单抗-IgG和抗- C3进一步分析。,（2）致敏对照RBC：取3人O型RBC混合用生理盐水洗涤，上清液倒尽后取压积RBC加等量抗-D血清，置37水浴箱致敏1h，取出后生理盐水洗涤3次，末次洗涤后降上层盐水倒尽，配成5%RBC盐水悬液，供阳性对照。,（3）未致敏的对照RBC：除不用抗-D血清致敏外，其余按上述配制，供阴性对照。,标本,取受检者RBC以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后降上层盐水倒尽，配成5%RBC盐水悬液。,操作,（1）取3只小试管分别标记（受检、阳性对照、阴性对照），3只试管分别加入受检者5%RBC盐水悬液、致敏的5%“D” 阳性RBC盐水悬液、5%“D” 阴性RBC盐水悬液各一滴，再加入抗球蛋白血清1滴，混匀。,（2）以1000rpm离心试管，轻轻混合，观察结果。,结果判定,如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。,质量控制,（1）未洗涤的RBC或悬浮血浆中细胞及用酶处理过的RBC不能用于检测。 （2）所有结果应在检测结束时立即判断，并熟练掌握其判断标准，结果观察过迟、重悬浮过度均可产生假阴性。 （3）离心时间和速度应根据阳性对照反应程度适当调整，不适的离心和温育都会产生假阴性。,