检查方法与消毒灭菌

第十一章 细菌的检查方法,一、细菌形态检查法,一）不染色标本检查法,活菌轮廓 动 力,单染色法 复染色法 鉴别染色法 革兰染色 抗酸染色 荚膜染色 鞭毛染色 芽胞染色,特殊染色法,二）染色标本检查法,原 理：,细胞壁结构学说 等电点学说 化学结构学说,革兰染色法（Gram Stain）,由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。,涂 片,干 燥,固 定,染 色,水洗、吸干,镜 检,一、制备涂片标本,步 骤,二、染 色,紫色革兰阳性（G+）菌 红色革兰阴性（G-）菌,（1）鉴别细菌 （2）选择药物 （3）与致病性有关,意 义,结 果,细菌学诊断,二、病原菌的检查原则,标本的采集和运送,避免杂菌污染,运送注意保存,不同期不同标本,抗菌素使用前,采集病变明显部位,标本必须新鲜,病原菌的检查程序,药物敏感试验,标本,直接涂片镜检,分离培养,生化试验,血清学鉴定,动物试验,明确诊断,初步诊断,分子生物学技术,其他检测技术,观察菌落形态,染色镜检,原理,双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高4倍者方有意义,结果判断,血清学的诊断,- 已知抗原检测未知抗体,- 效价高低,- 动态观察,种 类,凝集试验 -,肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等,中和试验 -,梅毒VDRL、RPR试验等,沉淀试验 -,抗“O”试验等,补体结合试验 -,Q热柯克斯体抗体检测等,杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物,第十二章 消毒与灭菌,消毒,disinfection,灭菌,sterilization,无菌,asepsis,防腐,antisepsis,防止或抑制体外细菌生长繁殖,不含活菌,杀死物体上的所有微生物,无菌操作,抹布上的细菌,菜板上的细菌,热力灭菌法,一、物理消毒灭菌法,焚烧-最彻底的灭菌方法,烧灼-直接用火焰灭菌方法,干烤-加热160-180 2小时,干热(dry heat)灭菌法,杀菌机理：,高温使菌体蛋白凝固变性,红外线-热效应只在照射表面产生,微波-热效应具有一定的穿透性,湿热(moist heat)灭菌法,加压蒸汽灭菌法,最有效的灭菌方法121,煮沸消毒法,水煮1005分钟(繁殖体)-2小时(芽胞),流通蒸汽消毒法,巴氏消毒法,间歇蒸汽灭菌法,水蒸汽100 15-30分钟(繁殖体),反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌,较低的温度（6130分钟）杀灭致病菌,20-30分钟,湿热灭菌与干热灭菌的比较,同一温度下，湿热比干热灭菌效果好,原因,1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 2、湿热的穿透力比干热大 3、湿热的蒸汽有潜热,辐射杀菌法,紫外线,杀菌机理：,波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用,干扰DNA的复制与转录,紫外线穿透力较弱,特点：,应用范围：,空气及不耐热物品的表面消毒,光复活作用及光复活酶,杀菌机理：,应用范围：,电离辐射,包括高速电子、X射线和 射线,产生游离基,破坏DNA。,一次性医用塑料制品的消毒 食品的消毒不破坏其营养成分,超声波杀菌法,超声波,杀菌机理：,频率高于20kHz/s而不被人耳感觉到的声波,过水时的空化作用（空穴效应）,特点：,应用范围：,粉碎细胞，提取细胞组分,革兰阴性菌较为敏感,滤过除菌法,用机械性阻挡除去液体或空气中的细菌,滤菌器,含有微细小孔0.22微米,只允许液体或气体通过, 而大于孔径的细菌等颗粒不能通过,适用范围,血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌,滤菌过程,低温与干燥,在低温状态下真空抽去水分,用途：保存菌种,冷冻真空干燥法：,二、化学消毒灭菌法,杀菌机理,使菌体蛋白凝固变性,使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢,破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含 物逸出,按杀菌能力分类,可杀死包括芽胞在内的所有微生物,1、高效消毒剂,适用于不耐热力，但要进入体内的物品,包括含氯消毒剂、过氧化物消毒剂 醛类消毒剂、环氧乙烷等,2、中效消毒剂,适用于纤维内窥镜、喉镜、麻醉器材等,包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等,不能杀死包括芽胞，可杀死繁殖体（包 括结核分枝杆菌）、真菌、多数病毒,可杀死多数细菌繁殖体，不能杀死芽胞、 结核分枝杆菌、某些抵抗力强的真菌和病毒,3、低效消毒剂,适用于皮肤、粘膜、物体表面和地面等,包括季胺盐类消毒剂、氯乙定、高锰酸 钾等,常用消毒剂种类,各种消毒剂的应用,影响消毒剂作用的因素,消毒剂,细菌,环境,种类,浓度,作用时间,菌龄,种类,有机物,温度,酸硷度,1、试述常用热力灭菌法的作用机制及适用范围 2、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素 3、简述革兰染色的原理、步骤、结果及意义 4、据细菌的生物学性状，如何对一未知菌提出微 生物学的诊断方案？,预习：,微生物的遗传与变异,思考题,