新版gmp微生物控制常识课件

微生物控制常识,国外消毒行业状况,美国的消毒产品主要是含氯化合物、过氧化物、季铵盐化合物 欧洲的消毒产品主要是酚类化合物、醛类化合物、季铵盐化合物，限制使用过氧化物，禁止使用含氯化合物 日本只使用含氯化合物、过氧化物，氧化电位水，允许使用季铵盐,国内外消毒产品的差异,消毒技术标准不一样 区分消毒产品的方法不一样 使用过程的控制不一样,国家对消毒药品或器械的管理,根据中华人民共和国传染病防治法、中华人民共和国传染病防治法实施办法和消毒管理办法的有关规定，在中华人民共和国境内生产、经营、使用和检验消毒产品的组织，医疗卫生机构以及传染病疫源地和其他一切需要消毒的场所，所使用的消毒药品或器械必须经中华人民共和国卫生部批准，并按批准使用的范围和方法在消毒中使用。 中华人民共和国卫生部规定消毒药、械按其性能特点，可在物体表面、环境、水体、织物等范围内使用。 所有消毒药、械的许可批件均可按产品名称或批件号在卫生部官方网站上查询。,消毒和灭菌的区别,消毒是指将传播媒介上的病原微生物清除或杀灭，使其达到无害化。 灭菌是指将传播媒介上一切微生物全部清除或杀灭，特别是抗力最强的细菌芽孢。,消毒剂的效能划分,高效消毒剂：指可杀灭一切细菌繁殖体（包括分枝杆菌）、病毒、真菌及其孢子等，对细菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定杀灭作用，达到高水平消毒要求的制剂。 中效消毒剂 ：指可杀灭分枝杆菌、真菌、病毒、及细菌繁殖体等微生物，达到消毒要求的制剂。 低效消毒剂：指仅可杀灭细菌繁殖体和亲脂病毒，达到消毒要求的制剂。,消毒剂（Disinfectant）：能够破坏有害细菌（但不是孢子）生长的一类化学或物理试剂。由于其毒性而通常仅作用于非生命物质。 杀菌剂（Antiseptic）：能够破坏微生物并且适用于皮肤消毒（低毒性的）的一类化学物质。 抑菌剂（Bacteriocide): 使细菌致死 抑菌（Bacteriostatic）: 抑制任何细菌的增长 杀孢子剂（Sporicide）: 使孢子致死 杀真菌剂（Fungicide）: 杀死真菌的试剂 熏蒸（Fumigation）: 用消毒剂的蒸气进行消毒的过程。通常用于封闭的环境如房间或隔离箱 灭菌（Sanitisation）: 降低微生物污染水平的过程，可以通过化学试剂或物理过程（如：氯，加热，紫外灯）实现这一过程,消毒剂的基本定义,各种微生物对消毒剂的抵抗力,目前认为，微生物对消毒因子的敏感性，从低到高的排列顺序为： 1.亲脂病毒（有脂质膜的病毒），例如乙肝病毒、流感病毒等 2.细菌繁殖体 3.真菌 4.亲水病毒（没有脂质包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰质病毒等 5.分枝杆菌，例如炭疽杆菌芽孢、龟分枝杆菌等 6.细菌芽孢，例如炭疽杆菌芽孢、枯草杆菌芽孢等 7.朊病毒（感染性蛋白质）,常规的消毒手段,1.低热消毒法（巴斯德消毒法）：至今国内外仍然广泛应用于对牛奶、对血清或者是对一些医疗器械的消毒。 2.热力灭菌：在所有的可利用的消毒灭菌方法中，热力灭菌是一种应用最早，效果最可靠，使用最广泛的方法，热可以灭活一切微生物，包括细菌繁殖体，真菌，病毒和抵抗力最强的芽孢，并且加热时温度越高，杀伤力越大。因此，热力灭菌不仅广泛应用于医学消毒灭菌，而且工业灭菌上也深受重视。 3.过滤灭菌：以物理阻留的方法，去除介质中的微生物，主要用于液体和气体物质的洁净消毒处理。如微孔滤膜除菌 4.微波杀菌：紫外线等 5.化学消毒：次氯酸钠，碳酸，乙醇，臭氧，环氧乙烷等,安全、低残留，对设备或表面尽可能无腐蚀性，对产品无毒，无污染 宜与常规使用的清洁剂相容，水中溶解度高 符合需要控制微生物的类型和数量 本身及其使用浓度的溶液稳定 水的硬度，有机物或其他物质对其消毒效力影响小。,消毒剂选择的一般原则,浓度：并非浓度越高消毒效力越好，应按照供应商提供的信息配制合理的消毒剂浓度 污染程度：包括生物负荷及类型 pH：不同类型的消毒剂有不同的最佳pH使用范围 温度：通常消毒剂效力虽温度升高而增加，但也有例外，如次氯酸不适合于高温使用 水的硬度或金属离子：一些消毒剂的效力会因金属离子或硬水而下降 配方：许多消毒剂的乙醇溶液消毒效力会非常高。螯合剂和缓冲盐也可以提高消毒剂的效力 接触时间：保证充分的接触时间确保消毒剂效力,影响消毒剂效力的主要因素,消毒剂在选择时应根据抗菌谱选择安全性高，低毒的产品 消毒剂的效力会受到溶液浓度，pH值，生物污染水平，接触表面材质等多种因素影响,小结,从2010版GMP看,无菌更衣与除菌过滤要求,无菌更衣,1.新版GMP对无菌更衣的要求 2.无菌更衣过程 3.人员培训与确认,各环节降低污染的措施,人、机、料、法、环五方面,人员,洁净区内的人数应当严加控制，检查和监督应当尽可能在无菌区生产的洁净区外进行。,生产管理,当无菌生产正在进行时，应当特别注意减少洁净区内的各种活动。应当减少人员走动，避免剧烈活动散发过多的微粒和微生物。由于所穿工作服的特性，环境的温湿度应当保证操作人员的舒适性。 来自人员的污染占整个生产污染的比例？,人员,第二十三条 应当按照操作规程更衣和洗手，尽可能减少对洁净区的污染或将污染物带入洁净区。,从新版GMP看 除菌过滤工艺及验证,灭菌方法,基本要求 第八章设备 第四十一条过滤器应当尽可能不脱落纤维。严禁使用含石棉的过滤器。过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量造成不利影响。第四十二条进入无菌生产区的生产气体（如压缩空气、氮气，但不包括可燃性气体）均应经过除菌过滤，应当定期检查除菌过滤器和呼吸过滤器的完整性。 生物制品附录 第二十五条管道系统、阀门和呼吸过滤器应当便于清洁和灭菌。宜采用在线清洁、在线灭菌系统。密闭容器（如发酵罐）的阀门应当能用蒸汽灭菌。呼吸过滤器应为疏水性材质，且使用效期应当经验证。 第四十七条 培养基宜在线灭菌。向发酵罐或反应罐中通气以及添加培养基、酸、碱、消泡剂等成分所使用的过滤器宜在线灭菌。,第七十五条 非最终灭菌产品的过滤除菌应当符合以下要求：,（一）可最终灭菌的产品不得以过滤除菌工艺替代最终灭菌工艺。如果药品不能在其最终包装容器中灭菌，可用0.22m（更小或相同过滤效力）的除菌过滤器将药液滤入预先灭菌的容器内。由于除菌过滤器不能将病毒或支原体全部滤除，可采用热处理方法来弥补除菌过滤的不足。 （二）应当采取措施降低过滤除菌的风险。宜安装第二只已灭菌的除菌过滤器再次过滤药液，最终的除菌过滤滤器应当尽可能接近灌装点。 （三）除菌过滤器使用后，必须采用适当的方法立即对其完整性进行检查并记录。常用的方法有起泡点试验、扩散流试验或压力保持试验。 （四）过滤除菌工艺应当经过验证，验证中应当确定过滤一定量药液所需时间及过滤器二侧的压力。任何明显偏离正常时间或压力的情况应当有记录并进行调查，调查结果应当归入批记录。 （五）同一规格和型号的除菌过滤器使用时限应当经过验证，一般不得超过一个工作日。,风险,设计,完整性,验证,时限与反复使用,不同灭菌工艺的无菌保证能力,灭菌工艺选择的决策树,产品是否可以121湿热灭菌15分钟,产品是否可以湿热灭菌F08分钟，达到SAL106,产品处方是否可以通过微生物滞留过滤器过滤,（四）使用无菌组分配制和灌封,（一）使用高压灭菌锅12115分钟,（三）无菌过滤和无菌加工结合使用,否,是,否,是,否,是,（二）使用湿热灭菌F08分钟,除菌过滤的风险,过滤前料液的生物负荷 过滤器的选择风险与验证困难 过滤工艺的操作与控制 过滤系统的设计与灭菌验证,应该在什么时候做完整性测试?,灭菌前？ 灭菌后，过滤前使用前？ 过滤后？,什么时候检测完整性？,FDA对无菌过滤工艺的指南 正常情况下, 滤器应在过滤前，即组装好后，且灭菌后执行完整性检测. 非常重要的是:在过滤后对滤器进行完整性检测,从而查看滤器是否泄漏和膜已破损. 一般认为过滤前后的常规性完整性检测是现行GMP的要求. EU GMP 对于已灭菌的滤器的完整性检测应该在使用前和使用后立即执行,例如泡点,扩散流及压力保持试验.,测试起泡点的方法,冲洗,加压,增加压力直到连续起泡在下游出现,扩散流测试方法,上 游 压 力,压缩空气,水浸入法测试,0,2.6,bar,0,10,20,Time (min.),装上干的滤芯,在上游充满水,加压并保持,测量压力衰减,压力导致折叠式滤膜进一步压缩现象是有一定的水流,完整性测试失败处理措施,为什么要进行完整性测试?,除菌工艺需要： 滤器性能 过滤线的设计与滤器灭菌 完整性测试标准的确定 法规要求及贸易需要 出口认证（FDA，COS, EDMF） SFDA检查,法规中认可的两类完整性测试方法,灭菌方法,第七十五条 非最终灭菌产品的过滤除菌应当符合以下要求： （五）同一规格和型号的除菌过滤器使用时限应当经过验证，一般不得超过一个工作日。,其他章节中对过滤的要求,设备,第四十一条 过滤器应当尽可能不脱落纤维。严禁使用含石棉的过滤器。过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量造成不利影响。,过滤器析出物评估,在注射剂管理委员会的15及26号报告中描述了过滤器析出物评估方法。 了解析出物水平有利于： 决定过滤器预先冲洗体积 决定过滤器能否用于小体积过滤（无法冲淡和稀释析出物） 直接灌装（这时第一瓶的析出物含量最高 ） 考虑使用两种方法： _在实际药物中的析出物 _用溶剂来模拟，检测析出物,设备,第四十二条 进入无菌区生产区的生产用气体（如压缩空气、氮气，但不包括可燃性气体）均应经过除菌过滤，应当定期检查除菌过滤器和呼吸过滤器的完整性。,无菌工艺模拟试验 -培养基灌装,主要内容,1.培养基灌装的技术要求 2.培养基灌装的实施要点 3.结果解释和偏差调查,1.培养基灌装的技术要求,欧盟灭菌工艺决策树,是,否,药液除菌过滤及无菌灌封,否,否,是,是,采用F08的湿热灭菌，以达到SAL10-6,无菌工艺模拟试验定义,无菌工艺模拟试验 Process Simulation Testing （PST） 培养基灌装 Media Fill 采用培养基代替药品进行无菌灌装对无菌工艺进行验证。此模拟工艺称之为“培养基灌装”。,进行培养基灌装的目的,验证一个无菌工艺 对无菌工艺过程无菌保证水平的综合评估（ 设备、人员、操作、灭菌过程、生产环境等） 对无菌操作人员进行资格确认 确认进行重大变更后对无菌工艺的影响 作为问题调查的手段 综合反映生产线整体的无菌保证情况，无体现具体某批产品或某个产品的无菌性,培养基灌装试验的频率,初始验证：每班次连续做3批验证 随后每半年针对不同班次/工艺进行一次再验证 所有日常操作人员每年都必须参加至少一次培养基灌装验证 空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验,培养基灌装试验的频率,影响无菌灌装过程中无菌保证水平的重大变更需要进行培养基灌装 判断： 灌装层流改造 胶塞进料装置变更 终端无菌过滤器改变位置 灭菌程序变更,培养基灌装批量,培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量 批次量5000瓶，通常500010000瓶 手工灌装 VS 隔离器无菌生产工艺 跨班次生产，大批量生产,灌装速度、瓶子尺寸、灌装量,原则 速度慢，产品暴露时间长；速度快，有时造成较多的干扰 瓶子大（包括敞口大小），灌装速度慢 尽量按产品实际灌装体积或更多，体积应能充分接触所有表面、并足够支持微生物生长 举例： 多规格的瓶子 - 最慢的速度，最大的瓶子规格;最小的瓶子规格，最快的速度 单一规格的瓶子 正常或略慢速度,49,最长允许的灌装时间（如考察操作人员疲劳操作风险） 有代表性的正常性操作活动的数量、种类和复杂性，非常规的干扰和各类突发事件（如维修、灌装中断等） 冻干过程 生产线速度和模具的规格,最差条件挑战,50,人