临床血液学检验技术实验四POX和PAS
过氧化物酶染色（POX） 过碘酸-雪夫反应（PAS）,实验四,请问： 以上都是什么细胞？,化学染色,细胞化学染色Cytochemical Staining,实质是原位显示细胞结构成分，对各种化学成分作定位、定性及半定量分析的方法。 用于急性白血病鉴别，血液病辅助诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断及发病机制探讨。 细胞化学染色包括三个步骤：,过氧化物酶染色 Peroxidase Staining （POX） 过碘酸雪夫反应（糖原染色) Periodic Acid-Schiff (PAS) reaction 酯酶染色、碱性磷酸酸染色、铁染色,过氧化物酶染色（POX）,原理： POX分解H2O2 ，产生新生态氧，使底物氧化，变为有色染料沉积。 POX存在于粒细胞、部分单核细胞胞浆内。,细胞内的过氧化物酶能将无色的二氨基联苯胺的氢原子转移给H2O2 ，释放新生氧，使前者变为有色染料（棕黄色或蓝黑色）沉积在细胞质酶所在部位。,二氨基联苯胺法（DAB ）,国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐法,二氨基联苯胺法,注意：所用染液覆盖血膜即可，不要浪费,10 min,新鲜涂片,A液联苯胺溶液3滴（覆盖标本即可）,B液等量H2O2溶液3滴,吹匀,流水冲洗2min，甩干，,水洗，待干，镜检,滴加C液3滴，D液6滴混匀,然后,min,注意事项 （1）标本要新鲜 （2）使用前，试剂平衡至室温，用前摇匀。 （3）用后要盖好，防止挥发 （4）加试剂要充分混匀，使染色均匀,结果判断（100×） 阳性：胞浆中出现棕黄色或蓝黑色颗粒,（）无颗粒沉着 （±） 颗粒细小，分布稀疏 （+）颗粒较粗，常呈局灶性分布，1/4 （+）颗粒粗大，弥散分布，1/2 （+）颗粒粗大，均匀分布或聚集，3/4 （+）颗粒布满细胞，可覆盖胞核,正常血细胞POX染色 粒细胞系统：早幼粒以下阶段细胞均为阳性（粗大），且细胞成熟逐渐加强，嗜酸粒细胞阳性最强 单核细胞内POX呈弱阳性（颗粒细小疏松、弥散性分布）。 正常人淋巴细胞、红细胞、巨核细胞、浆细胞、成熟嗜碱性粒细胞，均无POX；,1.辅助鉴别急性白血病的类型，首选、最重要化学染色（观察白血病细胞内颗粒） 急性粒细胞白血病 AML（+） 急性淋巴细胞白血病 ALL（-）(阳性率3) 急性单核细胞白血病 AMOL（-/±） 2. 辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病（APL)（强阳性）、急性单核细胞白血病（AMOL)（弱阳性）、恶性组织细胞病（MH)（阴性）,临床意义,A: APL B: AMML C: AMOL D: ALL,观察对象：克隆增生细胞群,过碘酸是一种氧化剂，能使细胞内含有乙二醇的糖类氧化产生双醛基，醛基与schiff试剂中的品红结合，形成紫红色化合物，定位于含有多糖成分的部位。,Periodic Acid-Schiff (PAS) reaction,过碘酸雪夫反应（糖原染色）,过碘酸雪夫试剂主要组成成份,过碘酸雪夫反应,浸染,结果 阳性反应：胞质内染红色或紫红色，呈弥 散状、颗粒或块状。胞核染成绿色。,正常血细胞PAS染色特点,临床意义,1、鉴别白细胞疾病的性质（白血病细胞） 淋巴系统恶性增生时多呈强阳性-ALL、CLL、淋巴瘤（红色颗粒或块状） 急性粒细胞白血病阳性为：细颗粒，弥散状分布。 急性单核细胞白血病阳性为：细颗粒，胞质边缘颗粒较粗大。 急性巨核细胞白血病阳性为：粗颗粒状、小块状或弥散分布。,2、鉴别红系增生的性质（有核红细胞） 红血病、红白血病、MDS为强阳性 地中海贫血、IDA 、巨幼细胞性贫血、HA 、AA 阴性 3. Gaucher 细胞 ：强阳性 4. Niemman-pick 细胞 (-/±)（空泡阴性，空泡之间胞质为阳性）,注意事项： 1.试剂要在室温 2.雪夫试剂勿在空气中暴露过久，否则 溶液变红失效 3.结果及时观察，放置1周后逐渐褪色,粒细胞阳性呈弥散性、细颗粒状。,粒细胞阳性呈弥散性、细颗粒状。 单核细胞阳性呈细颗粒状，分布边缘颗粒大。 巨核细胞阳性呈颗粒状或块状。 幼红细胞阴性。,CLL,ALL,ALL中粗 颗粒散在分布,A:红白血病 B:巨幼贫,红白血病 PAS 染色,示教1101室,进门后从左到右,骨髓检查顺序：,瑞氏染色发现异常数量细胞（如白血病细胞）。 化学染色确定异常细胞归属。 回到瑞氏染色分类，观察形态。 下诊断。,实验材料与方法,血片或骨髓片 病例1：反应性白细胞增高（大部分同学）（观察正常细胞） 病例2：急性早幼粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血前几天、急性单核细胞白血病（部分同学）（观察白血病细胞） 病例3：巨幼贫（部分同学）（观察有核红细胞） 每人2张玻片，分别做POX和PAS 明确需要化学染色鉴别的目的细胞群,POX与PAS化学染色的原理、正常细胞特点与临床意义。 记录本次课中POX和PAS的细胞染色结果。,作业,1 min,-10 min,新鲜涂片,A联苯胺溶液4-5滴,B等量H2O2溶液,吹匀,流水冲洗2min，待干，,水洗，待干，镜检,C:D液（1:2）复染35 min,注意：所用染液覆盖血膜即可，不要浪费,将干燥血片浸入A液，固定3060秒 （冲洗，待干）,浸入B液氧化5 10 min， 冲洗，待干,浸入C液，氧化10 15 min， 冲洗 ，待干,滴加D液，复染5min,镜检,冲洗，待干,POX,PAS,正常细胞形态POX,正常细胞形态PAS,CLL,急性早幼粒细胞白血病,急性单核细胞白血病,
