临床血液学检验技术血液凝固分析仪
血液凝固分析仪,20170420,第二节 目录,血液凝固分析仪 一、血凝仪分型与检测原理 二、血凝仪基本结构与评价 三、血凝仪的维护 四、血凝仪临床应用与进展 病例分析 思考题,掌握 熟悉 了解,20170420,血液凝固分析仪概述 automated coagulation analyzer,ACA,采用一定分析技术，对血栓与出血有关成分自动检测的临床常规检验仪器 血栓与止血实验室中最基本的设备,20170420,血液凝固分析仪概述,发 展 史 1910年：Kottman 最早的血凝仪 1950年：Schnitger和Gross 基于电流法的 血凝仪 20世纪70年代前 为血凝仪的初级阶段,20170420,血液凝固分析仪概述,20世纪70年代：第一代产品 单通道、终点法 半自动血凝仪 20世纪80年代末：第二代产品 多通道、多种 分析方法与原理的半自动血凝仪,各代血凝仪的特点,20170420,血液凝固分析仪概述,20世纪90年代:第三代产品 多通道、 多方法、多功能全自动血凝仪,20170420,凝血仪发展史,凝血仪 20世纪年代 特 点 1ST 70 单通道、单一测定原理、半自动 2ND 80 多通道、多种测定原理、半自动 3RD 90 多种测定原理、全自动,返回本节目录,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,（一）血凝仪分型 按自动化程度 半自动血凝仪 全自动血凝仪 全自动血凝工作站,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,（二）血凝仪检测原理 主要检测方法： 凝固法 底物显色法 免疫学法 干化学法等,彼此有何不同？,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,（一）凝固法原理（生物物理法） 凝血因子激活剂加入到待检血浆血浆体外凝固凝血仪记录凝固过程的变化(光/电/机械运动等)变化信号转变成数据计算机收集、处理数据、得出检测结果,呵！是血浆凝固的变化,20170420,凝血终点法,检测纤维蛋白原转变成纤维蛋白凝块所需时间。,20170420,倾斜试管法,纤维蛋白原纤维蛋白凝块：倾斜试管时液体可流动,纤维蛋白原纤维蛋白凝块:倾斜试管时不再流动,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,（一） 凝固法 1.电流法(钩方法) 2.超声分析法 3.光学法：比浊法（透射、散射比浊法） 4.磁珠法：光电探测法，电磁探测法,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,1.电流法：钩方法,20170420,钩方法原理,纤维蛋白原纤维蛋白丝:钩可上下自由移动，无纤维蛋白丝钩出。,纤维蛋白原纤维蛋白丝:纤维蛋白丝可被钩出,20170420,20170420,将电极插入待检样品中，其中一个可以上下运动。当两个电极都血浆中的时候，电路是连通的,其中一个电极向上运动离开血时，电路是断开的。,血浆中加激活剂，纤维蛋白形成，运动电极向上运动时，可钩纤维蛋白丝，由于纤维蛋白是导电的，故此时电路仍可连通，此时仪器即可将其判为凝固终点。,一、血凝仪分型与检测原理,将电极插入待检样品中，其中一个可以上下运动。当两个电极都血浆中的时候，电路是连通的,其中一个电极向上运动离开血时，电路是断开的。,一、血凝仪分型与检测原理,1.电流法：钩方法,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,血浆中加激活剂，纤维蛋白形成，运动电极向上运动时，可钩纤维蛋白丝，由于纤维蛋白是导电的，故此时电路仍可连通，此时仪器即可将其判为凝固终点。,1.电流法：钩方法,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,1.电流法：钩方法 将样品作为电路的一部分，由于纤维蛋白具有导电性，利用电流的断与否来判断纤维蛋白的形成与否，即判断凝固终点。,20,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,2.超声分析法 利用超声波测定血浆在体外凝固过程中发生的变化,21,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,3.光学法（比浊法）：是根据血浆凝固过程中浊度变化，导致光强度变化来测定相关因子,有何不同？谁优,20170420,光学法仪器应用原理, 透射光+散射光,凝固法（散射比浊法）660nm 发色底物法（透射比色法）405nm 免疫比浊法（透射比浊法）405/575/800nm,散色光比浊法,透射光比浊法,信号 激发光,透射光 激发光,信号 ,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,光学法血凝仪工作流程,20170420,2.光学法 血液凝固导致光强度变化判断凝固终点,比浊法： 散射比浊法：散射光 弱 强 透射比浊法：透光度 强 弱 吸光度 弱 强,20170420,散射比浊法/透射比浊法,光通过样品杯，发生透射和散射 样品杯中的血浆在凝固过程中: 纤维蛋白原纤维蛋白 理学性状改变 散射光 弱强. 透光度 强弱,20170420,散射比浊法：,根据待测样品在凝固过程中散射光的变化来确定凝固终点的检测方法,20170420,凝血常见检测方法,光学法 散射光,散射光,散射光强度增加,光源,凝固反应 进行,凝固反应 进行,检出部,随着纤维蛋白凝块的形成：散射光强度渐增加 完全凝固以后，散射光的强度就稳定下来,光源与光探测器呈90°直角 样本与试剂快速混合的初始：散射光极弱,20170420,检测方法： 光线由一小型光源发出，射至样本。 光敏二极管接收到所产生的散射光线，并将光线转化成弟子信号。 这些信号被微型计算机存储，计算，从而得出凝血时间的数值。,凝固法 光学法 散射光,20170420,20170420,试剂混合的瞬间，散射光最弱，将散射光强度置为0， 在血浆样品凝固完全后,散射光强度最强，将散射光强度置为100， 0100之间的光强度变化描成一条曲线，仪器可设定一个点(比如50)所对应的时间为凝血时间。,20170420,仪器的抗干扰功能,黄疸、溶血标本 仪器选择的检测波长与BIL、Hgb的吸收波峰不重叠就可避开干扰。 （CA凝固法检测波长660nm）,Hgb,BIL,400,450,500,550,600,400,350,300,250,650,20170420,Scattered Light,Time,Normal,Low Fbg Plasma,Lipemia Plasma,Normal Plasma,0%,100%,100%,0%,Time,Scattered Light,100%,0%,Abnormal,散射光检测+百分比原理 -消除本底影响，抗干扰能力强 结果精确度高.,以牺牲有效信号为代价，对高浊度标本未必有效,20170420,凝血酶原时间 PT 凝固法,原理 在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间。其凝固时间取决于凝血因子、的水平。 反映外源凝血系统最常用的筛选试验。,50ul血浆,加入100微升凝血酶原时间反应试剂,加温3分钟,660nm检测,20170420,部分凝血活酶时间 APTT 凝固法,原理 37条件下，以鞣花酸激活因子和，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，在Ca²+参与下，观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为活化部分凝血活酶时间 内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验。,50ul血浆,50ul部分凝血活酶时间反应试剂,加温3分钟,660nm检测,50ul20毫摩尔氯化钙溶液,加温3分钟,20170420,透射比浊法,根据待测样本在凝固过程中吸光度的变化确定凝固终点 光源与光探测器呈直线安排 样本与试剂快速混合的初始：吸光度极弱 随着纤维蛋白凝块的形成：吸光度强度渐增加 完全凝固：吸光度的强度稳定,20170420,透射比浊法示意图,反应体系中浊度增加时，透光度减少（吸光度增加）,20170420,透射比浊法示意图,纤维蛋白原纤维蛋白： 纤维蛋白凝集，反应体系的浊度发生变化,20170420,凝血常见检测方法,光学法 透射光,透過光,检出部,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,纤维蛋白的形成与吸光度,啊？为何在50%？,20170420,20170420,散射比浊法/透射比浊法比较,浊度测量原理： 散射法：光源，样本与接收器成直角排列，接收器得到的完全是浊度测量所需的散射光。 散射光 弱强. 透射法：光源，样本与接收器成直线排列，接收器得到的是很强的透射光和较弱的散射光，前者有效，后者需扣除，要进行校正 透光度 强弱,20170420,3.光学法 血液凝固导致光强度变化判断凝固终点,比浊法： 散射比浊法：散射光 弱 强 透射比浊法：透射光 强 弱,20170420,3.光学法,散射/透射比浊法 优点：灵敏度高，仪器结构简单，易于自动化 缺点：易受干扰（如：样本的光学异常，测试杯的光洁度，加样中的气泡等）,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,4. 磁珠法原理 磁珠法是根据磁珠运动幅度随血浆凝固过程中粘度的增加而变化来测量凝血功能的。 光电探测法 电磁珠探测法。,45,20170420,磁珠法原理：,当纤维蛋白原没有转变成纤维蛋白凝块，磁珠可在血浆中转动,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，磁珠不能再转动,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,47,4. 磁珠法原理 （1）光电探测法 测试杯中放有磁珠。测试时，测试杯下面的永久磁铁旋转，带动杯中磁珠沿杯壁旋转。测试杯的侧壁外安装有红外反射式光电器件监视磁珠运动变化。 根据运动力学原理当血浆粘度增大后，旋转的磁珠将向杯中心靠拢，光电器件检测不到磁珠时测量结束。 不受特异血浆干扰,20170420,48,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,（2）电磁珠法探测法 （双磁路磁珠法）原理,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,双磁路磁珠法原理,测试杯的两侧各有一组驱动线圈，产生恒定的交替电磁场，使杯内去磁小钢珠保持等幅振荡运动； 加入凝血激活剂，随着纤维蛋白的增多，血浆黏稠度增加，小钢珠运动振幅逐渐减弱，将运动幅度衰减到50时确定为凝固终点,20170420,凝血常见检测方法,磁珠法 方法二,电磁石,高频波,高频波,凝固反应进行,血浆与试剂,磁珠振动,电磁石,粘稠度的増加,磁珠振幅减少,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,磁珠法与光学法原理主要区别 磁珠法：检测血浆凝固过程磁电信号变化 光学法：检测血浆凝固过程光信号变化,20170420,磁珠法,抗干扰 完全不受干扰溶血，黄疸，高脂血症，测试杯的光洁度，加样中的气泡等影响 节约试剂 手工法1，光学法1/2，磁珠法1/4,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,（二）血凝仪检测原理 主要检测方法： 凝固法、底物显色法、免疫学法、 干化学法等。,彼此有何不同？,20170420,一、血凝仪分型与检测原理,2.底物显色法原理： 实质为光电比色原理，是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性，也称生物化学法,20170420,发色底物法 透过光检测方式 测定波长 405nm 比浊法,发色底物法,20170420,基本原理,待检样品：含有活性酶或加入活性酶 人工合成化合物（含酶裂解位点 连接产色物质） 解离产色物质 对硝基苯胺(PNA) 样品颜色变化 推出被检物质的含量,20170420,凝血因子对发色底物作用后所产生颜色的深浅，可计算所测酶的含量。目前多使用自动化的血凝仪来完成。,发色底物法：,20170420,1.对酶的检测,检测凝血酶： 凝血酶 产色物质 多肽PNA 在含
